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肠道病毒71型VP1蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定
引用本文:包 林,张 黎,曾晓燕,郭喜玲,史凤娟,黄明明,梁淑仪,汪 华,焦永军.肠道病毒71型VP1蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定[J].南京医科大学学报,2013(1):37-41.
作者姓名:包 林  张 黎  曾晓燕  郭喜玲  史凤娟  黄明明  梁淑仪  汪 华  焦永军
作者单位:南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系;江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所;南京农业大学动物医学系
基金项目:国家科技重大专项(2008ZX10002-001,2009ZX10004-904);江苏省医学重点人才项目(RC2011082)
摘    要:目的:制备肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)VP1外壳蛋白单克隆抗体。方法:利用重组纯化的EV71-VP1蛋白为抗原免疫BALB/c鼠,按常规杂交瘤技术进行细胞融合,对阳性杂交瘤细胞进行筛选及亚克隆,获得1株能稳定分泌抗EV71-VP1抗体的杂交瘤细胞株6F2B9,细胞体外扩大培养后的上清用Protein G柱纯化,超滤后用BCA法测其浓度,用免疫球蛋白亚类鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体亚型,间接ELISA方法检测其效价和特异性,间接免疫荧光法检测其与EV71病毒的特异性结合能力。结果:本研究得到的抗EV71-VP1抗体DSE-136,纯化后浓度为1.9 g/L,免疫球蛋白亚类为IgG2b,轻链属于κ链;间接ELISA检测效价为1∶3.2×105;间接免疫荧光结果显示其可与EV71病毒特异性结合。结论:成功制备出1个效价高、特异性好的抗EV71-VP1单克隆抗体DSE-136,为VP1抗原诊断、疫苗研发及其效果评价奠定了基础。

关 键 词:肠道病毒71型  VP1蛋白  单克隆抗体
收稿时间:2012/10/10 0:00:00

Preparation and characterization of enterovirus 71 VP1 monoclonal antibody
Bao Lin,Zhang Li,Zeng Xiaoyan,Guo Xiling,Shi Fengjuan,Huang Mingming,Liang Shuyi,Wang Hua and Jiao Yongjun.Preparation and characterization of enterovirus 71 VP1 monoclonal antibody[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2013(1):37-41.
Authors:Bao Lin  Zhang Li  Zeng Xiaoyan  Guo Xiling  Shi Fengjuan  Huang Mingming  Liang Shuyi  Wang Hua and Jiao Yongjun
Affiliation:2 ( 1 Department of Epidemiology and Biostatistics,NJMU,Nanjing 211166; 2 Institute of Pathogenic Microbiology, Jiangsu Centers for Disease Prevention and Control,Nanjing 210009; 3 Department of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China)
Abstract:
Keywords:enterovirus 71  VP1 protein  monoclonal antibody
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