| 抗人乳腺癌候选抑制蛋白1单克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 袁芳,鞠吉雨,刘艳菲,王丽娜,邸大琳,梁淑娟.抗人乳腺癌候选抑制蛋白1单克隆抗体的制备及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2010,26(12). |
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| 作者姓名： | 袁芳 鞠吉雨 刘艳菲 王丽娜 邸大琳 梁淑娟 |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金资助项目，山东省教育厅资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:制备抗人乳腺癌候选抑制蛋白1(BCSC-1)蛋白单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:构建原核表达载体pET-30a-BCSC-1,在原核表达系统E.coliBL21(DE3)中表达重组人BCSC-1蛋白。超声洗涤纯化重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得分泌小鼠抗人BCSC-1蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法检测其特异性。将真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1转染入乳腺癌MCF-7细胞,通过免疫组化确定了人BCSC-1蛋白的表达。结果:成功构建了原核表达载体pET-30a-BCSC-1,经IPTG诱导表达出了重组人BCSC-1蛋白,主要以包涵体的形式存在沉淀中。用纯化的重组BCSC-1蛋白免疫小鼠后经融合筛选得到1株稳定分泌抗BCSC-1的mAb杂交瘤细胞株。通过ELISA、Western blot、免疫组化等方法鉴定,抗BC-SC-1的mAb能与BCSC-1蛋白特异性结合。结论:成功制备了小鼠抗人BCSC-1的mAb。
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| 关 键 词： | BCSC-1蛋白 原核表达 单克隆抗体 |
Preparation and characterization of monoclonal antibodies for human BCSC-1 protein |
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| YUAN Fang,JU Ji-yu,HU Yan-fei,WANG Li-na,DI Da-lin,HANG Shu-juan.Preparation and characterization of monoclonal antibodies for human BCSC-1 protein[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2010,26(12). |
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| Authors: | YUAN Fang JU Ji-yu HU Yan-fei WANG Li-na DI Da-lin HANG Shu-juan |
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