增生性瘢痕血管形成抑制作用中色素上皮衍生因子的分子克隆与真核表达

目的：克隆人色素上皮衍生因子(Pigment Epitheium-Derived Factor，PEDF)全长cDNA，建立稳定表达人PEDF分子的哺乳动物细胞系。方法：RT-PCR获取人PEDF cDNA，序列测定后克隆人真核表达载体pCDNA3．0中，用脂质体转染入HepG2细胞，G418筛选出稳定表达细胞系，用RT-PCR与Westem blot分别检测RNA和蛋白表达水平。结果：RT-PCR扩增得到预期大小的目的条带，序列分析表明成熟肽编码区与发表序列完全一致；克隆人pCDNA3．0中得到PEDF真核表达载体，G418筛选3周后得到稳定表达细胞系，RT-PCR与Westem blot显示PEDF在HepG2细胞中有高水平表达。结论：人PEDF全长cDNA成功克隆，并在哺乳动物细胞系HepG2中获得稳定表达，为进一步研究PEDF分子对增生性瘢痕血管形成的作用奠定了理论基础。