| 靶向c－Met的嵌合抗原受体T细胞制备及其对非小细胞肺癌的杀伤作用题录 |
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| 引用本文： | 闵静婷,张露,龙赤荣,樊红莲,李正红.靶向c－Met的嵌合抗原受体T细胞制备及其对非小细胞肺癌的杀伤作用题录[J].中华肿瘤杂志,2023(4). |
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| 作者姓名： | 闵静婷 张露 龙赤荣 樊红莲 李正红 |
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| 作者单位： | 1. 蚌埠医学院基础医学院;2. 蚌埠医学院生命科学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81472656)；;安徽省重点研究与开发计划项目(201904a07020019)； |
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| 摘 要： | 目的制备靶向c-Met蛋白的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T), 并检测其对人非小细胞肺癌(NSCLC)H1975细胞的体外杀伤作用。方法将含c-Met抗体scFv片段的CAR序列插入慢病毒质粒中, 用酶切质粒电泳, 检测目的基因正确性。质粒转染工具为HEK293细胞, 收集浓缩慢病毒, 通过慢病毒感染的方式制备第二代c-Met CAR-T, 通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot验证CAR序列的表达, 采用流式细胞术检测c-Met CAR-T的阳性率、细胞亚型, 流式细胞术验证NSCLC细胞H1975中c-Met蛋白的阳性表达并选择c-Met蛋白阴性表达的卵巢癌细胞A2780作为对照, 采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测c-Met CAR-T在效靶比为1∶1、1∶5、1∶10、1∶20时对H1975细胞的杀伤作用。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测c-Met CAR-T在靶抗原刺激下, 细胞因子白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IFN-γ的释放情况。结果成功合成c-Met CAR慢病毒重组质粒, 酶切条带位置符合理论值。基因测序结...
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| 关 键 词： | 肺肿瘤 嵌合抗原受体 c－Met |
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