李属坏死环斑病毒扬州分离物CP基因的原核表达及抗血清制备

李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus, PNRSV)严重危害蔷薇科植物，在世界范围内普遍分布。为建立快速有效的PNRSV检测方法，依据PNRSV CP基因序列设计引物，并从桃叶片上扩增PNRSV-CP片段，将双酶切产物插入原核表达载体pET28a中，获得重组质粒pET28a-CP^PNRSV,转化大肠埃希菌Rosetta菌株，IPTG诱导重组蛋白表达。SDS-PAGE电泳检测显示，在分子量约25 ku处有蛋白质条带，符合预期大小。镍柱亲和纯化PNRSV CP蛋白，以其纯化蛋白质免疫健康新西兰白兔，制备多克隆抗血清。Western blot、ELISA、Dot blot检测结果显示，制备的抗血清能检测到PNRSV CP基因在感病植物叶片中表达，而在健康植株中未检测到；制备的抗血清滴度稀释至1∶64 000时，仍能与纯化蛋白质发生特异性反应。综上，制备的PNRSV抗血清特异性强、效价高，可用于PNRSV的快速检测。