| 受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ转基因载体的构建及其在细胞水平上的有效性检测 |
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| 引用本文： | 绳纪坡,藤艳,杨晓,邓继先.受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ转基因载体的构建及其在细胞水平上的有效性检测[J].军事医学科学院院刊,2006,30(5):415-418,423. |
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| 作者姓名： | 绳纪坡 藤艳 杨晓 邓继先 |
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| 作者单位： | 北京生物工程研究所,北京,100071 |
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| 摘 要： | 目的：构建一种可以在哺乳动物细胞中蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的受控型转基因载体，为制备受控型蜕皮激素诱导表达截短型MGF-Ⅰ的转基因小鼠奠定基础。方法：利用分子克隆技术构建受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的转基因载体；将其电转至AM1菌中，利用其中的Cre重组酶将载体上两个同向LoxP序更锚定的新霉素（neomycin）基因删除，解除其对蜕皮激素诱导表达系统的阻断作用，利用PCR、酶切和测序鉴定删除情况；将重组后的载体转染至COS7细胞中进行瞬间表达，蜕皮激素诱导后回收培养上清和细胞裂解物进行Western印迹分析，检测hIGF-Ⅰ的表达情况。结果和结论：成功构建大小为13．6kb的转基因载体pOE-IGF-Ⅰ；转化至AM1中后，PCR、酶切和测序的结果都证明其中的Cre酶能够将载体上neomycin基因删除；重组后的载体转染至COS7细胞中进行诱导表达，Western印迹实验证明截短型MGF-Ⅰ能够在COS7细胞中顺利表达。上述结果证明该蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的受控型转基因载体能够用于转基因小鼠的制备。
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| 关 键 词： | 蜕皮激素 转基因 Cre/LoxP重组 转染 |
| 文章编号： | 1000-5501（2006）05-0415-05 |
| 收稿时间： | 2006-01-26 |
| 修稿时间： | 2006-01-26 |
Construction and availability test in eukaryocyte of ecdysone-inducible controlled transgene expressing truncated hIGF-Ⅰ |
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| SHENG Ji-Po,TENG Yan,YANG Xiao,DENG Ji-Xian.Construction and availability test in eukaryocyte of ecdysone-inducible controlled transgene expressing truncated hIGF-Ⅰ[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2006,30(5):415-418,423. |
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| Authors: | SHENG Ji-Po TENG Yan YANG Xiao DENG Ji-Xian |
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| Affiliation: | Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ecdysone transgenes Cre/LoxP recombination transfection |
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