| 亮氨酸拉链结构蛋白基因的合成及其表达 |
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| 引用本文： | 何冬兰,Keisuke Makino.亮氨酸拉链结构蛋白基因的合成及其表达[J].化学与生物工程,2003,20(5):35-37. |
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| 作者姓名： | 何冬兰 Keisuke Makino |
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| 作者单位： | 1. 中南民族大学化学与生命科学学院,湖北,武汉,430073
2. 京都大学能源研究所,京都611-0011,日本 |
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| 基金项目： | 国家留学基金委资助(99842135) |
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| 摘 要： | 为探讨亮氨酸拉链蛋白与DNA的结合机理,设计了含有GCN4亮氨酸拉链蛋白基区结合DNA的必需的35个氨基酸的折叠片段,并将其克隆到Escherichia coli BL21表达.以ZG1(+)、ZG1(-)、ZG2(+)、ZG2(-)、ZG3(+)、ZG3(-)寡聚核苷酸片段在PCR自动热循环系统连接得到亮氨酸拉链蛋白基因片段,将此片段克隆到pET3b质粒中,酶切后用2%琼脂糖电泳检测证明克隆成功,将这种重组质粒转化到E.coli DH5α,发现pET3b重组体在E.coli DH5α中表达成功,从转化子中分离得到重组质粒pET3b,序列分析证明插入序列为合成的亮氨酸拉链蛋白基因;将重组质粒pET3b在E.coli BL21于5 mL含有50 μg*mL-1氨苄青霉素和34 μg*mL-1氯霉素的LB液体培养基中以IPTG为诱导剂,37℃下表达,10%SDS-PAGE检测到外源基因蛋白质分子量为4000 Da左右;重组体在10 L含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中、28℃时能大量表达.
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| 关 键 词： | 亮氨酸拉链结构 蛋白基因 合成 表达 克隆 |
| 文章编号： | 1672-5425(2003)05-0035-03 |
| 修稿时间： | 2003年9月4日 |
Synthesis and Expression of Leucine-Zipper Protein Domain |
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| Keisuke Makino.Synthesis and Expression of Leucine-Zipper Protein Domain[J].Chemistry & Bioengineering,2003,20(5):35-37. |
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| Authors: | Keisuke Makino |
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