| 慢病毒载体介导的shRNA对小鼠T细胞CD28基因表达的影响 |
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| 引用本文： | 程娜娜,桑威,陈翀,徐开林.慢病毒载体介导的shRNA对小鼠T细胞CD28基因表达的影响[J].徐州医学院学报,2010,30(5):309-313. |
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| 作者姓名： | 程娜娜 桑威 陈翀 徐开林 |
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| 作者单位： | 1. 徐州医学院移植免疫实验室,江苏,徐州,221002
2. 徐州医学院移植免疫实验室,江苏,徐州,221002;徐州医学院附属医院血液科实验室,江苏,徐州,221002 |
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| 摘 要： | 目的探讨编码针对小鼠CD28的短发卡状RNA（short hairpin RNA,shRNA）的慢病毒载体对小鼠T细胞CD28基因表达的影响。方法设计并合成3对靶向小鼠CD28的特异性干扰序列和1对非特异性干扰序列,亚克隆入慢病毒载体pLB中,构建出重组慢病毒干扰质粒,行PCR鉴定并进一步测序证实。分别将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293FT细胞,生产慢病毒颗粒,并依据绿色荧光蛋白（GFP）表达水平检测病毒滴度。慢病毒感染小鼠脾淋巴细胞,实时荧光定量RT-PCR和Western blot技术分别从mRNA水平和蛋白水平检测CD28的表达。结果PCR鉴定及测序结果证实4种重组慢病毒质粒均构建成功,重组慢病毒滴度均达1×1011U/L。感染T细胞后,CD28基因mRNA和蛋白表达量均有明显下降。结论成功构建了CD28 shRNA慢病毒载体,可有效下调小鼠T细胞CD28基因的表达,其为进一步研究体内沉默CD28基因控制移植物抗宿主病奠定了基础。
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| 关 键 词： | shRNA 慢病毒载体 CD28 移植物抗宿主病 |
The effects of lentiviral vector-mediated delivery of short hairpin RNA on CD28 expression in mouse T lymphocytes |
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| CHENG Nana,SANG Wei,CHEN Chong,XU Kailin.The effects of lentiviral vector-mediated delivery of short hairpin RNA on CD28 expression in mouse T lymphocytes[J].Acta Academiae Medicinae Xuzhou,2010,30(5):309-313. |
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| Authors: | CHENG Nana SANG Wei CHEN Chong XU Kailin |
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| Affiliation: | 1.Laboratory of Transplant Immunology,Xuzhou Medical College,Xuzhou,Jiangsu 221002,China;2.Laboratory of Department of Hematology,Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College,Xuzhou,Jiangsu 221002) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | shRNA CD28 |
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