基于miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨肾衰泄浊汤干预慢性肾脏病合并动脉粥样硬化作用机制

目的 探讨微小核糖核酸126（miRNA126）调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在慢性肾脏病合并动脉粥样硬化（CKD AS）中的作用，以及肾衰泄浊汤干预5/6肾切除术联合高脂饲养的CKD AS大鼠的作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组、肾衰泄浊汤低、中、高剂量组。通过5/6肾切除术联合高脂饲养10周建立大鼠CKD AS模型，肾衰泄浊汤低、中、高剂量组（6.0、12.0、24.0 g·kg^-1·d^-1），氯沙坦组（20 mg·kg^-1·d^-1）剂量灌胃，进行相应的干预8周，然后处死大鼠，取材进行相应检测。全自动生化分析仪器检测大鼠肾功能和血脂：血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平；苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色主动脉组织并在光学显微镜下进行病理学观察；通过透射电子显微镜观察自噬体和自噬溶酶体；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠miRNA126、PI3K、Akt、mTOR mRNA水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠磷酸化（p）-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、苄氯素-1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠血清SCr、BUN、TC、TG、LDL-C均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，氯沙坦组与肾衰泄浊汤低、中、高剂量组大鼠SCr、BUN、TC、TG、LDL-C明显降低（P<0.05）；与假手术组比较，模型组大鼠内膜可见增厚斑块形成，单核巨噬细胞浸润，少量泡沫细胞，中膜平滑肌纤维排列紊乱，胶原纤维增多，氯沙坦组与肾衰泄浊汤各组较模型组病变减轻；与模型组比较，肾衰泄浊汤中、高剂量组中电镜的自噬小体及自噬溶酶体的数量增多；与假手术组比较，模型组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著下降（P<0.01），PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，肾衰泄浊汤高、中、低剂量组及氯沙坦组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著升高（P<0.01），PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著降低（P<0.01）。与假手术组比较，模型组p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达显著升高（P<0.01），Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白水平显著降低（P<0.01）。与模型组比较，氯沙坦组和肾衰泄浊汤低、中、高剂量组的p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达降低（P<0.05），Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高（P<0.05）。结论 CKD AS大鼠主动脉组织miRNA126表达降低，激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制自噬通量；肾衰泄浊汤通过miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路，恢复主动脉内皮细胞的自噬，保护CKD血管损伤，减少As斑块的形成，减缓心血管并发症的发展。

Mechanism of Shenshuai Xiezhuo Decoction in Intervention of Chronic Kidney Disease Combined with Atherosclerosis Based on Regulation of PI3K/Akt/mTOR Signaling Pathway by miRNA126