| GCLC基因上游AHR/ARNT元件负性调控GCLC基因在大鼠支气管上皮细胞的表达 |
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| 引用本文： | 赖 宁,李 冰,王 健,付 欣,洪 玮,冉丕鑫.GCLC基因上游AHR/ARNT元件负性调控GCLC基因在大鼠支气管上皮细胞的表达[J].中国生物化学与分子生物学报,2009,25(5):429-435. |
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| 作者姓名： | 赖 宁 李 冰 王 健 付 欣 洪 玮 冉丕鑫 |
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| 作者单位： | （广州医学院实验医学研究中心,广州510182;广州医学院第一附属医院广州呼吸疾病研究所,呼吸疾病国家重点实验室,广州510120） |
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| 摘 要： | 研究谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列中2个AHR/ARNT元件的功能，从而了解γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因转录调节特征．分别构建缺失2个位点AHR/ARNT元件的GCLC基因上游近端序列的萤光素酶报道基因载体以及含有2个AHR/ARNT元件核心序列的萤光素酶报道基因载体．转染大鼠支气管上皮细胞(RTE)，比较检测野生与缺失报道载体的基因转录调控效率；利用电泳迁移率变动实验（EMSA）和超级迁移率变动实验检测AHR/ARNT元件与AHR以及ARNT因子的特异性结合；通过转染AHR因子真核表达质粒进一步确定AHR/ARNT元件与AHR结合在GCLC基因表达中的最终作用．结果显示，相比其野生序列，缺失AHR/ARNT元件（-1 090～-1 085）和双缺失AHR/ARNT元件（-1 090～-1 085，-215～-210）的GCLC上游调控序列报道载体在RTE显著提高萤光素酶表达（均P＜0.05），而缺失AHR/ARNT元件（-215～-210）则未见显著影响（P＞0.05）； 独立AHR/ARNT元件（-1 090～-1 085）具有转录促进作用（P＜0.05）而独立AHR/ARNT元件（-215～-210）无明显影响（P＞0.05）．转染CMV2-AHR能够抑制野生型和缺失型报道载体的萤光素酶表达（P＜0.05）．EMSA证实GCLC基因上游调控区域的2个AHR/ARNT元件均有核蛋白结合，并且超级迁移率变动实验显示结合的蛋白主要含有转录因子AHR以及ARNT．因此，2个AHR/ARNT元件均可以与异源二聚体AHR/ARNT结合，AHR/ARNT元件（-1 090～-1 085）是GCLC基因中重要的抑制元件．
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| 关 键 词： | 谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC) 转录调控 AHR/ARNT元件 大鼠支气管上皮细胞（RTE） |
| 收稿时间： | 2008-10-19 |
Expression Inhibition of GCLC Gene by Proximal AHR/ARNT Element in Rat Bronchial Epithelial Cells |
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| LAI Ning,LI Bing,WANG Jian,FU Xin,HONG Wei,RAN Pi-Xin.Expression Inhibition of GCLC Gene by Proximal AHR/ARNT Element in Rat Bronchial Epithelial Cells[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2009,25(5):429-435. |
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| Authors: | LAI Ning LI Bing WANG Jian FU Xin HONG Wei RAN Pi-Xin |
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| Affiliation: | (ExperimentalMedicalResearchCenter,GuangzhouMedicalCollege,Guangzhou510182,China;StateKeyLaboratoryofRespiratoryDisease,GuangzhouInstituteofRespiratoryDisease,FirstAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalCollege,Guangzhou510120,China |
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