| 应用CRISPR/Cas9系统构建敲除APE1基因的AC16心肌细胞株 |
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| 引用本文： | 郭润民,卫月,姜佳美,陈铭亮,王志强.应用CRISPR/Cas9系统构建敲除APE1基因的AC16心肌细胞株[J].解剖学研究,2019,41(5):438-441. |
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| 作者姓名： | 郭润民 卫月 姜佳美 陈铭亮 王志强 |
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| 作者单位： | 广东医科大学顺德妇女儿童医院/佛山市顺德区妇幼保健院,广东顺德,528300;广东医科大学附属医院,广东湛江,524001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;广东省医学科学技术研究项目;广东省自然科学基金;广东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的应用CRISPR/Cas9系统构建敲除APE1基因的AC16心肌细胞株,为研究APE1在心肌细胞的功能提供研究基础。方法根据RISPR/Cas9靶向原理设计人APE1基因的导向RNA(sgRNA),构建sgRNA-LentiCRISPRV2重组质粒并转入293T细胞制备sgRNA-Cas9慢病毒;该病毒浸染AC16心肌细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞并稀释至单克隆。免疫印迹法测定单克隆细胞中APE1蛋白表达。结果免疫印迹法检测的结果显示,筛选出的单克隆细胞的APE1蛋白表达完全缺失;PCR产物测序结果表明,靶向敲除APE1的心肌细胞,不存在sgRNA介导CRISPR-Cas9随机的核苷酸插入。结论应用CRISPR/Cas9系统成功构建了敲除APE1基因的AC16心肌细胞株。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9系统 脱嘌呤/嘧啶核酸内切酶1 AC16心肌细胞株 基因敲除 |
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