| 星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺研究 |
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| 作者姓名： | 吴雄 夏建开 苗艳丽 陈绍红 张兆霞 郭婉婷 李棂灵 |
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| 作者单位： | 1.广东海洋大学化学与环境学院，广东 湛江 524088,1.广东海洋大学化学与环境学院，广东 湛江 524088,1.广东海洋大学化学与环境学院，广东 湛江 524088,2.广东海洋大学食品科技学院现代生物化学实验中心，广东 湛江 524088,1.广东海洋大学化学与环境学院，广东 湛江 524088,1.广东海洋大学化学与环境学院，广东 湛江 524088,1.广东海洋大学化学与环境学院，广东 湛江 524088 |
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| 基金项目： | 广东省教育厅2015年重点平台及科研项目（No.2015KTSCX057）；广东海洋大学2017年度大学生创新创业训练计划项目（No.CXXL2017140） |
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| 摘 要： | 目的 本文利用星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺条件，并测定其体外抗凝血活性与溶栓效果。方法 首先运用星点设计-效应面法来确定菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胰糜蛋白酶和木瓜蛋白酶这四种酶各自酶解酪蛋白的最佳反应条件，然后在各酶的最佳反应条件下对酪蛋白进行复合酶解，制得酪蛋白复合酶解液，再运用凝血酶滴定改进法来测定其体外抗凝血活性，并用抗凝血活性最高的酪蛋白复合酶解液进行体外溶栓实验。结果 四种酶酶解酪蛋白的最佳反应条件分别如下:菠萝蛋白酶:pH为6.50、温度为60.00 ℃、酶用量为12 000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V)；胰蛋白酶和胰糜蛋白酶均为:pH为8.00、温度为50.00 ℃、酶用量为6 000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V)；木瓜蛋白酶:pH为6.50、温度为60.00 ℃、酶用量为4 000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1:7(m/V)。结论 本实验条件下，加酶组合为“菠萝蛋白酶-胰蛋白酶-胰糜蛋白酶-木瓜蛋白酶”的复合酶解制备的酪蛋白酶解液具有最高的体外抗凝血活性，为100.0 ATU/mL；新西兰大白兔的血栓线用100.0ATU/mL的酶解液浸泡24 h后全部溶解，且兔血与100.0 ATU/mL酪蛋白酶解液的比例(V/V）为1:1和4:6的样品组放置48 h仍不凝固。
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| 关 键 词： | 星点设计-效应面法 酪蛋白 复合酶解 抗凝血肽 体外溶栓 |
Optimization of preparation technology of anticoagulant peptides by complex enzymatic hydrolysis of casein by central composite design-response surface method |
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| Authors: | WU Xiong XIA Jiankai MIAO Yanli CHEN Shaohong ZHANG Zhaoxi GUO Wanting and LI Lingling |
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| Affiliation: | 1.College of Chemistry and Environment of Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;2.College of Food Science and Technology,Modern Biochemistry Experimental Center,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China,1.College of Chemistry and Environment of Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;2.College of Food Science and Technology,Modern Biochemistry Experimental Center,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China,1.College of Chemistry and Environment of Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;2.College of Food Science and Technology,Modern Biochemistry Experimental Center,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China,1.College of Chemistry and Environment of Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;2.College of Food Science and Technology,Modern Biochemistry Experimental Center,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China,1.College of Chemistry and Environment of Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;2.College of Food Science and Technology,Modern Biochemistry Experimental Center,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China,1.College of Chemistry and Environment of Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;2.College of Food Science and Technology,Modern Biochemistry Experimental Center,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China and 1.College of Chemistry and Environment of Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;2.College of Food Science and Technology,Modern Biochemistry Experimental Center,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Central composite design-response surface method Casein complex enzymatic hydrolysis Anticoagulant peptides Thrombolysis in vitro |
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