稳定表达p27蛋白的肝细胞癌细胞株的建立与鉴定

目的 探讨细胞周期抑制蛋白p27在肝癌细胞凋亡过程中的调节功能及其作用机制，建立稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株。方法 提取含有人p27基因的真核细胞表达载体pcDNA3-p27，用限制性内切酶Eco RI和NotI酶切后，经琼脂糖凝胶电泳鉴定。用脂质体介导的基因转染法，分别将真核细胞表达载体pcDNA3-p27和pcDNA3导入不表达p27蛋白的人肝癌细胞系HHCC细胞中，通过G418筛选获得转入目的的基因的阳性细胞克隆。用免疫组织化学染色法和Western blot检测p27蛋白的表达，经多次用有限稀释法连续克隆化，直至获得100％稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株。结果 琼脂糖凝胶电泳表明，可见597bp的p27基因片段。免疫细胞化学染色和Western blot检测表明，转染pcDNA3-p27的HHCC细胞大部分有p27蛋白的表达，而转染空载体pcDNA3或未转染的HHCC细胞，均未见p27蛋白表达。经连续3次克隆化后，转染pcDNA3-p27的HHCC细胞100％表达p27蛋白。结论 成功地获得了稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株，命名为HCC－p27。

Establishment and identification of hepatocellular carcinoma cell strain stably expressing p27 protein