ISL-1诱导脂肪干细胞向起搏样细胞分化 |
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引用本文: | 张健,黄从新.ISL-1诱导脂肪干细胞向起搏样细胞分化[J].医学研究杂志,2019,48(2):95-100. |
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作者姓名: | 张健 黄从新 |
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作者单位: | 武汉大学人民医院心内科.武汉大学心血管病研究所.心血管病湖北省重点实验室 430060,武汉大学人民医院心内科.武汉大学心血管病研究所.心血管病湖北省重点实验室 430060 |
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基金项目: | 湖北省技术创新专项(重大项目)基金资助项目(2016ACA153);中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(2042015kf0229) |
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摘 要: | 目的 探讨过表达胰岛素基因增强子结合蛋白1(insulin gene enhancer binding protein 1,ISL-1)的慢病毒在体外转染脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),能否诱导ADSCs向起搏样细胞分化。方法 取第3~5代ADSCs,随机分成Bank.mCherry和胰岛素基因增强子结合蛋白1(insulin gene enhancer binding protein 1,ISL-1)3组,按分组分别转染病毒,经荧光强度和流式分析确定最适感染复数,与乳鼠心室肌细胞(neonatal rat cardiomyocytes,NRVMs)共培养7天后进行实时荧光定量聚合酶式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR).蛋白质印迹.免疫荧光检测分析,期间观察细胞形态和搏动频率变化,并用膜片钳技术记录细胞内电流活动。结果 分离贴壁后的ADSCs呈长梭形,慢病毒转染ADSCs的最适感染复数为50。ISL-1组ADSCs形态呈多样化,窦房结特异性基因HCN4.Cx45和Tbx3的mRNA表达水平上调,而工作心肌特异性基因Nkx2.5下调,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。ISL-1组大多数细胞可检测到HCN4表达并且可记录到超极化内向电流。结论 经ISL-1基因修饰的ADSCs通过体外心肌微环境诱导,产生了一定的高表达窦房结标志性基因并具有细胞内典型超极化电活动的起搏样细胞。
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关 键 词: | 生物起搏 ISL-1 脂肪干细胞 起搏样细胞 |
收稿时间: | 2018/5/23 0:00:00 |
修稿时间: | 2018/5/31 0:00:00 |
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