重组MHCⅠ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达 |
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引用本文: | 姜曼,万瑛,周镜然,邹丽云,韩俊峰,吴玉章.重组MHCⅠ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达[J].免疫学杂志,2004,20(2):100-102,109. |
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作者姓名: | 姜曼 万瑛 周镜然 邹丽云 韩俊峰 吴玉章 |
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作者单位: | 第三军医大学全军免疫学研究所,重庆400038 |
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基金项目: | 国家“973”计划资助项目 (2 0 0 1CB51 0 0 0 1 ) |
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摘 要: | 目的 构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子K^b(K^b-EGFP融合蛋白),并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法 RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子K^b cDNA,克隆入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP分子的上游,脂质体转染COS-7细胞,G418加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果 分子克隆的方法获得了预期的重组质粒,质粒经DNA序列测定证实阅读框无误,转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光,特征性地分布于细胞质膜,及核周、膜下的囊泡结构中。结论 所构建的K^b-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布,提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征,为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型。
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关 键 词: | MHCⅠ类分子 绿色荧光蛋白 融合蛋白 重组表达 |
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