长链非编码RNA LINC00313与miR-342-3p/膜联蛋白A2轴在肝细胞癌细胞中的作用与机制

背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一,研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达,进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程;膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调,促进恶性表型的发生,并可能受上游miR-342-3p的调控。因此,本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物）,用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达;MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖;进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡;Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达;免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）;双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型,验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。
结果 与人肝实质细胞比较,Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高,而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较,LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05）,miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）;与LINC00313 siRNA组比较,共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高,而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中,LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达,miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示,与无处理的Li-7细胞移植瘤比较,LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低,肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低,而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调,LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达,进而促进HCC细胞的恶性表型。