| 摘 要： | 本文旨在研究手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良原代小胶质细胞的培养方法,获得高活性、高纯度且与在体状态更接近的小鼠海马原代小胶质细胞,以用于小胶质细胞的相关研究。选取2～4周龄SPF级C57BL/6J小鼠,PBS灌注后取海马组织剪碎,使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离海马组织,获得单细胞悬液,再经去碎片试剂去除髓鞘等组织碎片。在4°C孵育CD11b免疫磁珠15 min后,细胞悬液经免疫磁珠细胞分选(magnetic activated cell sorting, MACS)两次过柱提高小胶质细胞纯度。将分选后细胞离心重悬,种在多聚赖氨酸包被后的24孔培养板中,用完全培养基或TIC培养液(以TGF-β、IL-34和胆固醇为主要营养成分的无血清培养基)培养4 d后进行其他检测。结果显示:(1)使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离可得到含有(56.03±2.10)%活细胞的单细胞悬液;(2)与免疫抗体包被筛选法(immunopanning)相比,经过MACS两步分选后,可得到更多且纯度高达(86.20±0.68)%的小胶质细胞;(3)使用TIC培养液培养4 d后,可获得分枝状、形态类似静息状态的原代小胶质细胞;(4) q RT-PCR检测显示,与完全培养基培养相比,TIC培养液培养的小胶质细胞在4 d和7 d后TNF-α、IL-1β及CCL2 m RNA表达水平更接近急性分离后的小胶质细胞。上述结果提示,采用手动解离海马组织,经MACS两步分选及TIC培养后,可以获得高纯度、高活性且接近在体静息状态的小胶质细胞。
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