| FAD依赖的葡萄糖脱氢酶多拷贝毕赤酵母菌株的构建及高效表达 |
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| 引用本文： | 董聪,王玥,罗同阳,高庆华,王庆庆.FAD依赖的葡萄糖脱氢酶多拷贝毕赤酵母菌株的构建及高效表达[J].微生物学杂志,2023(4):18-25. |
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| 作者姓名： | 董聪 王玥 罗同阳 高庆华 王庆庆 |
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| 作者单位： | 河北省微生物研究所有限公司，河北 保定 071051 |
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| 基金项目： | 河北省科学院科技计划项目（20202）；河北省科学院高层次人才培养与资助项目（2021G27）；河北省科学院高层次人才培养与资助项目（2022G16） |
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| 摘 要： | 通过体外多拷贝构建实现FAD依赖的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH)在毕赤酵母(Pichia pastoris)X33菌株中的高效表达。将前期构建的经密码子偏好性优化FAD-GDH基因插入到pPICZαA质粒中，通过同尾酶法酶切酶连构建含1～4个表达盒的重组表达质粒，分别电转至毕赤酵母X33中，成功筛选到各种重组菌株。qRT-PCR测定结果表明，载体所含的表达盒数目与嵌合进毕赤酵母基因组中的GDH基因拷贝数之间存在正相关关系。重组菌在试管水平用甲醇诱导72 h,酶活达到最高，其中4拷贝的转化子表达水平最高；选择1拷贝和4拷贝转化子进行10 L发酵罐扩大培养，1拷贝菌株诱导108 h酶活达到最高697.125 U/mL,4拷贝菌株诱导132 h酶活达到最高1 063.279 U/mL,比1拷贝酶活提高52.52%。结果表明通过增加目的基因拷贝数策略有助于提高FAD-GDH的表达量，为其进一步扩大生产提供参考。
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| 关 键 词： | FAD依赖的葡萄糖脱氢酶 多拷贝 重组菌株 高效表达 毕赤酵母 |
Construction of Multicopy Strains and High Expression of FAD-Dependent Glucose Dehydrogenase in Pichia pastoris |
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| DONG Cong,WANG Yue,LUO Tong-yang,GAO Qing-hu,WANG Qing-qing.Construction of Multicopy Strains and High Expression of FAD-Dependent Glucose Dehydrogenase in Pichia pastoris[J].Journal of Microbiology,2023(4):18-25. |
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| Authors: | DONG Cong WANG Yue LUO Tong-yang GAO Qing-hu WANG Qing-qing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | FAD-dependent glucose dehydrogenase multicopy recombinant strain highly expressed Pichia pastoris |
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