一贯煎诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的实验研究

目的体外实验观察一贯煎诱导分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesen-chymal stem cell，BMSC）定向分化肝细胞的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离原代大鼠BMSC，第3代细胞采用流式细胞仪分析表面细胞因子、诱导分化为脂肪细胞鉴定其干细胞特征；采用肝细胞生长因子联合成纤维细胞生长因子和一贯煎含药血清2种诱导方案连续培养BMSC共21天，PCR检测细胞甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）、白蛋白（albumin，AIb）、肝细胞核因子4eL（hepatocyte nuclear factor4α，HNF4α）mRNA表达情况，细胞免疫荧光检测细胞AFP和细胞角蛋白18（cytokeratin18，CKl8）的表达，染色高碘酸一希夫反应法观察细胞糖原形成，Western blot法检测细胞CK18、Wnt 3α、α-catenin蛋白的表达情况。结果全骨髓贴壁法分离的BMSC高表达白细胞分化抗原（cluster of differentiation，CD）90、29、44，低表达CD34和CD11b，成脂诱导2周后油红O染色可见大量脂滴。一贯煎药物血清和细胞因子诱导均可提高BMSC表达AIb、AFP、HNF4αmRNA表达水平，促进CK18蛋白表达，诱导21天后可检测到AFP和CK18的表达，可见细胞合成糖原颗粒，观察到BMSC内Wnt 3α和β-catenin表达下调。结论一贯煎可诱导大鼠BMSC向肝细胞样细胞分化，其机制与下调Wnt／β-catenin信号通路有关。