体外双分子荧光蛋白检测化学交联剂的研究

化学交联剂可用于研究蛋白质相互作用。分别以戊二醛和甲醛为交联剂,以Ni NTA Beads为固体介质,利用红色荧光蛋白(mCherry)和高可溶性绿色荧光蛋白(soluble GFP, sGFP)进行交联反应,通过激光共聚焦显微镜观察检测固体介质上双荧光强弱来判断交联效果并对交联效率进行评估,开发了一种快速、简便、高通量的体外初步筛选化学交联剂的荧光直观化检测新方法。结果表明:以戊二醛为交联剂时,最佳交联浓度为1.0%,交联效果显著,交联效率为95.6%;以甲醛为交联剂时,最佳交联浓度为1.5%,交联效果明显,交联效率为90.9%。通过激光共聚焦显微镜观察及交联效率评估,可以直观地检测到戊二醛、甲醛均使等比例mCherry和sGFP发生交联反应,与传统检测技术SDS-PAGE法的检测结果一致;并且对于戊二醛、甲醛作为交联剂的微量非等比例双分子荧光蛋白的交联反应,同样可以直观地检测到交联效果。该研究为体外检测荧光蛋白质交联反应中的化学交联剂的研究提供了一个简便、高效的直观化技术手段,同时也为体外初步大量快速筛选蛋白质交联反应化学交联剂提供了技术可能性。