红皮梨花青苷调控基因PyMYBa的克隆与表达分析

以红皮梨‘奥冠’为试材，采用RT-PCR结合RACE技术获得1个MYB基因，命名为PyMYBa。该基因开放读码框共714 bp，编码237个氨基酸。PyMYBa分子量27.4 kD，等电点8.78。氨基酸序列分析显示，在其N端具有保守的R2R3-MYB结构域，R3-MYB结构域含有bHLH结合基序。进化树分析表明，PyMYBa与花青苷调控MYB转录因子的同源性很高。基因表达结果表明，PyMYBa在梨叶、花、果皮中表达量明显高于果肉，果皮中的表达量与花青苷调控基因PyMYB10相比，无显著差异。遮光及MeJA处理后果皮中PyMYBa、PyMYB10的表达量变化与花青苷合成量变化趋势相似，推测PyMYBa为梨花青苷合成中重要的正向调控因子。通过原核表达试验获得了该基因的重组蛋白，SDS-PAGE电泳检测结果与预期蛋白分子量一致。