鸭IFN-β启动子双荧光素酶报告基因系统的构建及活性检测 |
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引用本文: | 高全新,刘云霞,程玉强,严亚贤,孙建和.鸭IFN-β启动子双荧光素酶报告基因系统的构建及活性检测[J].上海农业学报,2018(3). |
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作者姓名: | 高全新 刘云霞 程玉强 严亚贤 孙建和 |
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作者单位: | 上海市宝山区动物疫病预防控制中心;上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室 |
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摘 要: | 通过PCR方法扩增获得6个不同长度的鸭IFN-β启动子DNA片段,并连接至萤火虫荧光素酶报告质粒p GL3.0,构建包含6个鸭IFN-β启动子的报告质粒。分别将构建的报告质粒与内参报告质粒p RL-TK转染至DEF细胞,检测报告质粒在不同刺激下的荧光素酶活性。结果表明:包含鸭IFN-β启动子全长的报告质粒p GL-IFN-β-1593能够有效地被相应刺激物激活;截短研究表明,包含390 bp鸭IFN-β启动子的报告质粒p GL-IFN-β-453的荧光素酶活性与全长基本一致,且一定程度上可降低冗余碱基的不良影响,因此选取该质粒用于鸭IFN-β启动子活性检测。本研究建立的基于荧光素酶双报告基因系统的鸭IFN-β启动子活性检测方法,为后续鸭IFN-β通路研究提供了检测工具。
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