| 人SmD1抗原的酵母真核表达及其初步应用 |
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| 引用本文： | 杨湘越,吴文冰,兰小鹏.人SmD1抗原的酵母真核表达及其初步应用[J].微生物学通报,2009,36(1):0149-0153. |
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| 作者姓名： | 杨湘越 吴文冰 兰小鹏 |
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| 作者单位： | 南京军区福州总医院解放军临床检验医学研究所,福建,福州,350025 |
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| 基金项目： | 福建省青年人才科技创新基金资助项目(No. 2002J060) |
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| 摘 要： | 通过PCR扩增Sm D1基因, 与酵母表达载体pPIC9k重组, 构建表达质粒pPIC9k-Sm D1。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168, 在MD平板上筛选重组克隆, 用G418快速筛选高拷贝转化子, 阳性克隆经甲醇诱导表达后, 培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫酶斑点法(immunodot)鉴定。结果显示PCR产物约为360 bp, 符合预期, pPIC9k-Sm D1重组阳性克隆双酶切鉴定正确,测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致。表达产物Sm D1的分子量约16 kD, 高拷贝毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的。immunodot证实表达产物具有天然Sm D1分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。Immunodot的敏感性为96%, 特异性为100%, 与免疫印迹法(immunoblot, IBT)的符合率为98%。Sm D1在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达, 为下一步研究打下了基础。
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| 关 键 词： | Sm D1抗原 克隆表达 巴斯德毕赤酵母 |
Eukaryotic Expression and Primarily Application of Human Smith D1 Antigen in Methylotrophic Yeast Pichia pastoris |
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| YANG Xiang-Yue,WU Wen-Bing and LAN Xiao-Peng.Eukaryotic Expression and Primarily Application of Human Smith D1 Antigen in Methylotrophic Yeast Pichia pastoris[J].Microbiology,2009,36(1):0149-0153. |
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| Authors: | YANG Xiang-Yue WU Wen-Bing and LAN Xiao-Peng |
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| Affiliation: | PLA Medical Labouratery Center, Fuzhou General Hospital, Fuzhou, Fujian 350025, China;PLA Medical Labouratery Center, Fuzhou General Hospital, Fuzhou, Fujian 350025, China;PLA Medical Labouratery Center, Fuzhou General Hospital, Fuzhou, Fujian 350025, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sm D1 antigen Cloning and expression Pichia pastoris |
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