| 人sTNFR1真核表达载体构建及体外抑制TNF-α细胞毒效应 |
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| 引用本文： | 傅蕾,彭仕芳,谭德明.人sTNFR1真核表达载体构建及体外抑制TNF-α细胞毒效应[J].基础医学与临床,2007,27(12):1324-1328. |
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| 作者姓名： | 傅蕾 彭仕芳 谭德明 |
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| 作者单位： | 中南大学,湘雅医院,感染病科,湖南,长沙,410008 |
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| 基金项目： | 湖南省自然科学基金(05JJ30178) |
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| 摘 要： | 目的构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因(sTNFR1)的真核表达载体,研究sTNFR1对TNF-α细胞毒效应的抑制作用。方法以HeLa细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3.1(-)重组质粒亚克隆,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1(-)-sTNFR1瞬时转染QSG7701细胞,半定量PT-PCR法检测sTNFR1mRNA的表达,MTT法检测sTNFR1对TNF-α细胞毒效应的抑制作用。结果人sTNFR1基因被正确克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-);通过与3-磷酸甘油醛(GAPDH)比较,pcDNA3.1(-)-sTNFR1转染的QSG7701细胞中sTNFR1mRNA表达量明显高于空载体对照组和空细胞对照组(P<0.05);pcDNA3.1(-)-sTNFR1瞬时转染QSG7701细胞,TNF-α对其细胞毒性作用受到抑制,当TNF-α浓度为100μg/L时pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的细胞毒性较QSG7701下降64.8%。结论成功地构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-sTNFR1,TNF-α对瞬时转染pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的细胞株细胞毒性作用受到抑制。
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| 关 键 词： | 人可溶性肿瘤坏死因子受体1 真核表达 瞬时转染 细胞毒性作用 |
| 文章编号： | 1001-6325（2007）12-1324-05 |
| 收稿时间： | 2007-01-19 |
| 修稿时间： | 2007-05-29 |
Construction of eukaryotic recombinant sTNFR1 plasmid and its inhibitory effects on TNF-α cytotoxicity in vitro |
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| FU Lei,PENG Shi-fang,TAN De-ming.Construction of eukaryotic recombinant sTNFR1 plasmid and its inhibitory effects on TNF-α cytotoxicity in vitro[J].Basic Medical Sciences and Clinics,2007,27(12):1324-1328. |
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| Authors: | FU Lei PENG Shi-fang TAN De-ming |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human sTNFR1 eukaryotic expression transiently transfection cytotoxicity |
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