| Nonomuraea candida HMC10T中新结构套索肽noncaromin生物合成基因簇的克隆及异源表达 |
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| 引用本文： | 韩舒婷,马婧贤,盛勇,王珩瑜,邢利,罗晓霞,白林泉,邓子新,康前进.Nonomuraea candida HMC10T中新结构套索肽noncaromin生物合成基因簇的克隆及异源表达[J].微生物学报,2022,62(12):4927-4942. |
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| 作者姓名： | 韩舒婷 马婧贤 盛勇 王珩瑜 邢利 罗晓霞 白林泉 邓子新 康前进 |
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| 作者单位： | 上海交通大学生命科学技术学院, 微生物代谢国家重点实验室, 上海 200240;上海交通大学代谢与发育国际联合合作实验室, 上海 200240;塔里木大学生命科学学院, 新疆 阿拉尔 843300 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2021YFC2100600)；国家自然科学基金(31770034，31830104)；上海市自然科学基金(19ZR1475600) |
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| 摘 要： | 【目的】本研究旨在通过定向克隆菌株Nonomuraea candida HMC10T中一个新的Ⅱ型套索肽类生物合成基因簇，通过在放线菌底盘宿主中的异源表达，获得新结构套索肽noncaromin，并完成其抑菌活性分析。【方法】通过antiSMASH软件分析菌株N.candida HMC10T全基因组序列，确定新的Ⅱ型套索肽noncaromin的生物合成基因簇(biosynthetic gene cluster of noncaromin，nonc-BGC)。然后，利用ExoCET重组技术(exonuclease combined with RecET recombination)获得完整的nonc-BGC，得到重组质粒pJQK652，并通过λ-Red重组技术改造得到整合型质粒pJQK653。采用接合转移方法，将该质粒分别导入白色链霉菌、2株变铅青链霉菌、2株天蓝色链霉菌和红色糖多孢菌宿主中进行异源表达，再通过发酵和分离纯化获得目标套索肽noncaromin。最后，利用QTOF-ESI-MS2完成套索肽noncaromin的结构鉴定，并通过抗菌活性检测确定该化合物的生物活性。【结果】本研究利用ExoCET技术成功获得了完整的nonc-BGC，在6种放线菌宿主中成功异源表达，完成了noncaromin的结构鉴定，确定了其具有微弱的抗枯草芽孢杆菌活性。【结论】本研究在克隆得到新结构套索肽nonc-BGC的基础上，实现了该基因簇在6个放线菌底盘宿主中的成功表达，获得了1个具有微弱抑制枯草芽孢杆菌活性的新结构Ⅱ型套索肽noncaromin。本研究结果为发掘菌株N.candida HMC10T及其他放线菌中的新结构化合物提供了借鉴。
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| 关 键 词： | 念珠状野野村氏菌 套索肽 异源表达 结构鉴定 活性检测 |
| 收稿时间： | 2022/3/30 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/4/24 0:00:00 |
Cloning and heterologous expression of the new biosynthetic gene cluster of noncaromin from Nonomuraea candida HMC10T |
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| HAN Shuting,MA Jingxian,SHENG Yong,WANG Hengyu,XING Li,LUO Xiaoxi,BAI Linquan,DENG Zixin,KANG Qianjin.Cloning and heterologous expression of the new biosynthetic gene cluster of noncaromin from Nonomuraea candida HMC10T[J].Acta Microbiologica Sinica,2022,62(12):4927-4942. |
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| Authors: | HAN Shuting MA Jingxian SHENG Yong WANG Hengyu XING Li LUO Xiaoxi BAI Linquan DENG Zixin KANG Qianjin |
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| Affiliation: | State Key Laboratory of Microbial Metabolism, School of Life Sciences and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China;Joint International Research Laboratory of Metabolic&Developmental Sciences, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China;College of Life Science, Tarim University, Alar 843300, Xinjiang, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nonomuraea candida lasso peptides heterologous expression structural determination bioactivity analysis |
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