| 基于切刻内切酶信号放大的电致化学发光DNA生物传感器的研究 |
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| 引用本文： | 海洪,黄文刚,梁顺超,李建平.基于切刻内切酶信号放大的电致化学发光DNA生物传感器的研究[J].分析化学,2016(5):779-786. |
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| 作者姓名： | 海洪 黄文刚 梁顺超 李建平 |
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| 作者单位： | 电磁化学功能物质广西重点实验室,桂林理工大学化学与生物工程学院,桂林541004 |
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| 基金项目： | 21375031)本文系国家自然科学基金项目(.21165007 |
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| 摘 要： | 利用切刻内切酶的酶切作用实现信号放大,结合量子点高效的电化学发光性能,构建了一种新型电化学发光DNA生物传感器.将捕获探针DNA(c-DNA)通过自组装的方式固定到金电极表面,后与目标DNA(t-DNA)互补杂交形成双链DNA,利用切刻内切酶Nt.BstNBI特异性识别双链上的酶切位点(5'-GAGTC-3'),然后在c-DNA相应的切割位点(识别序列3'端后的4个碱基处)对其进行剪切,释放出目标链,参与下一轮的杂交及酶切,通过目标物的循环利用,实现信号放大.利用N-羟基琥珀酰亚胺(N HS)和1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺(EDC)活化羧基化CdTe量子点表面的羧基,与电极表面残留的c-DNA末端的氨基共价交联,通过测定捕获的量子点的电化学发光信号对目标DNA进行检测.优化后的检测条件为:c-DNA浓度1 μmol/L,杂交时间60 min,Nt.BstNBI浓度0.5 U/μL,酶切反应时间4h.在优化条件下,目标DNA浓度在2.0×10-13～2.0×10-11 mol/L范围内,其对数与电化学发光强度呈线性关系,检出限为7.3×10-14 mol/L.人体血样加标回收率为96.4％～108.0％.
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| 关 键 词： | DNA生物传感器 切刻内切酶 量子点 电致化学发光 信号放大 |
Ultrasensitive Electrochemiluminescence Biosensor for DNA Determination Based on Nicking Endonuclease Assisted Signal Amplification |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | DNA biosensor Nicking endonuclease Quantum dots Electrochemiluminescence Signal amplification |
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