| 摘 要： | 目的:建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定大鼠和人肝微粒体中1′-羟基咪达唑仑的含量,研究雷公藤多苷对体外大鼠与人肝微粒体细胞色素P45(0CYP)3A酶活性的抑制作用。方法:将不同质量浓度的雷公藤多苷(0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、50.0、100.0μg/ml)分别与大鼠和人肝微粒体(0.4 mg/ml)共同孵育20 min后终止反应,采用LC-MS/MS法测定孵育液中咪达唑仑的代谢产物1′-羟基咪达唑仑的浓度以评价CYP3A酶活性并计算酶活性抑制率,采用Graph Pad Prism 5.0软件进行拟合并计算半数抑制浓度(IC50)。色谱柱为Agilent Eclipse XBD-C18,流动相为水-甲醇(梯度洗脱),流速为0.3 ml/min,柱温为30℃,进样量为2μl。采用电喷雾电离(ESI),定量离子为m/z 342.01→324.1(1′-羟基咪达唑仑)、m/z 383.01→337.2(内标氯雷他定)。结果:1′-羟基咪达唑仑检测浓度在0.01~3μmol/L范围内与其和内标物峰面积比值呈良好线性关系;精密度试验RSD均小于10%,提取回收率为97.92%~101.65%,方法回收率为96.70%~104.10%,稳定性试验RSD均小于10%。雷公藤多苷对大鼠和人微粒体中CYP3A的IC50分别为(48.610±1.32)μg/ml和(4.754±1.12)μg/ml;在0.5~100.0μg/ml范围内雷公藤多苷对CYP3A酶活性有抑制作用,且与质量浓度呈正相关。结论:所建立的LC-MS/MS法可用于检测大鼠和人肝微粒体中1′-羟基咪达唑仑的含量。雷公藤多苷对体外大鼠和人肝微粒体药物代谢酶CYP3A均存在抑制作用,且对人肝微粒体CYP3A的抑制作用明显强于大鼠。
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