链霉菌FJS31-2 abxR2基因克隆表达及蛋白纯化 |
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引用本文: | 李泽鑫,王兰林,栗午娟,杨逸,张悦萌,高佩舒,田红英,岳昌武.链霉菌FJS31-2 abxR2基因克隆表达及蛋白纯化[J].化学与生物工程,2023(12):34-38. |
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作者姓名: | 李泽鑫 王兰林 栗午娟 杨逸 张悦萌 高佩舒 田红英 岳昌武 |
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作者单位: | 延安大学基础医学院延安市微生物药物创新及转化重点实验室 |
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基金项目: | 陕西省自然科学基础研究计划项目(2021JM-416); |
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摘 要: | 利用原核表达系统获得链霉菌FJS31-2 AbxR2重组蛋白,并进行纯化。通过PCR扩增abxR2基因,将扩增产物克隆至pET32a质粒上构建重组质粒pET32a-abxR2;将重组质粒转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达,并通过尿素洗涤方式对AbxR2重组蛋白进行纯化。酶切和测序结果均证实重组质粒pET32a-abxR2构建成功;在菌液OD600值为0.6、28℃、110 r·min-1、1.0 mmol·L-1 IPTG诱导4 h时,AbxR2重组蛋白的表达效果较好;采用尿素洗涤方式纯化AbxR2重组蛋白,可得到单一特异蛋白条带,效果较好。为研究AbxR2蛋白的结构和功能及提高Zunyimycins产量奠定了基础。
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关 键 词: | 链霉菌 AbxR2 基因簇 原核表达 蛋白纯化 |
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