| 靶向Pin1基因的shRNA干扰质粒的构建及其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用 |
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| 引用本文： | 郝华,李美宁,赵志兰,杜叶平,秦立元,程牛亮.靶向Pin1基因的shRNA干扰质粒的构建及其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用[J].粉末涂料与涂装,2009,22(3). |
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| 作者姓名： | 郝华 李美宁 赵志兰 杜叶平 秦立元 程牛亮 |
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| 作者单位： | 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,太原,030001 |
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| 摘 要： | 目的构建靶向Pin1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰真核表达质粒,并检测其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用。方法设计合成特异性针对人Pin1基因的寡核苷酸序列,退火后与pGenesil-1载体连接,构建靶向Pin1基因的shRNA真核表达质粒pGenesil-1-Pin1(+),利用脂质体转染大肠癌SW620细胞,以质粒pGenesil-1-Pin(-)转染细胞和未转染细胞为对照。利用荧光显微镜观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白,估算转染效率;应用实时荧光定量PCR和Western blot检测其对SW620细胞Pin1基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果所构建的特异Pin1shRNA真核表达质粒经酶切及测序证明构建正确,转染SW620细胞的转染效率为64%。shRNA对SW620细胞Pin1基因mRNA的抑制率在转染后72h最高,为70.2%,蛋白抑制率为60%。结论已成功构建了靶向Pin1基因的shRNA干扰真核表达质粒,可抑制SW620细胞Pin1基因mRNA的转录及蛋白的表达。
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| 关 键 词： | Pin1基因 RNA干扰 短发夹RNA 大肠癌 |
Construction of shRNA Interfering Plasmid Targeting Pin1 Gene and Its In-hibitory Effect on Pinl Gene of Colon Cancer SW620 Cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pin1 gene RNA interfering Short hairpin RNA(shRNA) Colon cancer |
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