YPS1/YPS2失活改进酿酒酵母An-α菌株β-葡萄糖苷酶分泌表达 |
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引用本文: | 郭敬涵,陆海燕,洪解放,贾玉蝶,邹少兰.YPS1/YPS2失活改进酿酒酵母An-α菌株β-葡萄糖苷酶分泌表达[J].微生物学通报,2021,48(12):4485-4495. |
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作者姓名: | 郭敬涵 陆海燕 洪解放 贾玉蝶 邹少兰 |
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作者单位: | 天津大学化工学院 天津 300085;天津大学石化中心 天津 300072 |
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基金项目: | 天津市科技计划(18YFZCNC01240);国家自然科学基金(31470208);国家重点研发计划(2019YFA0905600) |
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摘 要: | 背景] 工业酵母菌株的蛋白质表达通常存在表达量低、分泌效率低的问题。目的] 考察失活Yapsin蛋白酶Yps1p和Yps2p对β-葡萄糖苷酶在酿酒酵母An-α菌株中表达的影响。方法] 利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,首先构建得到未折叠蛋白响应(Unfolded Protein Response,UPR)指示菌株An-α(leu2::UPRE-lacZ)即An-αL,然后分别失活其YPS1和YPS2基因,导入以YEplac195为载体的β-葡萄糖苷酶表达质粒(简称BG),进行生长和酶活分析评价。结果] 菌株An-αL的YPS1和YPS2基因失活对其在酵母浸出粉胨葡萄糖(Yeast Extract Peptone Dextrose,YPD)培养基中的生长未造成明显的不利影响;导入质粒BG后将在酵母浸出粉胨纤维二糖(Yeast Extract Peptone Cellobiose,YPC)培养基中生长的最大OD600分别提高了21.9%和7.4%;最大总酶活值为0.087 5和0.068 6 U/(mL·OD600),是对照菌株相应值的2.268倍和1.778倍;分泌比例提高了19.4%和22.2%;β-葡萄糖苷酶表达水平与β-半乳糖苷酶酶活水平所代表的UPR信号响应值之间呈现良好的相关性。结论] YPS1和YPS2基因失活有助于改进酿酒酵母An-α菌株中β-葡萄糖苷酶的分泌表达。
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关 键 词: | YPS1/YPS2基因失活 酿酒酵母An-α β-葡萄糖苷酶 分泌表达 |
收稿时间: | 2021/4/2 0:00:00 |
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