| 去C末端JAK3基因重组逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王蓉,黄文芳,张平,章崇杰,蔡美英.去C末端JAK3基因重组逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达[J].四川省卫生管理干部学院学报,2004,23(4):241-243,275. |
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| 作者姓名： | 王蓉 黄文芳 张平 章崇杰 蔡美英 |
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| 作者单位： | 1. 四川省人民医院检验科,四川,成都,610071
2. 四川大学华西医学中心免疫教研室,四川,成都,610041 |
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| 摘 要： | 目的 :构建去C末端Jak3重组逆转录病毒载体 ,获得能稳定产生去C末端Jak3基因的重组逆转录病毒的细胞株 ,为利用去C 末端Jak3对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法 :用限制性内切酶从质粒PcJak3(ΔC)中切出目的基因并从凝胶中回收该目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC) ,通过转化感受态细菌后氨卞青霉素筛选、酶切及DNA测序鉴定 ;用脂质体LIPOFECTAMINE转染包装细胞PA317细胞并用G4 18筛选抗性细胞 ,转染的包装细胞包装出病毒粒子 ,同时用PCR方法检测PA317阳性细胞中是否插入目的基因片段 ;用该病毒感染靶细胞NIH3T3,G4 18筛选抗性克隆 ,检测出病毒滴度 ;经免疫沉淀 (IP)、SDS PAGE电泳、Westernblotting检测NIH3T3细胞中Jak3(ΔC)的表达情况。结果 :①重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC)酶切和DNA检序均表明已含有 2 796bp的Jak3(ΔC)基因 ;②转染的PA317阳性细胞经PCR扩增后得到与目的基因一致的片段 ;③病毒滴度为 1.2～ 2 .0× 10 4CFU/ml;④转染的NIH3T3细胞中表达出了Jak3(ΔC)蛋白 ,其分子量为 10 7KD。结论 :我们已成功构建了去C 末端Jak3重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC) ,并得到稳定产生病毒粒子的PA317细胞克隆 ,为利用Jak3(ΔC)对白血病
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| 关 键 词： | Jak3 显性阴性分子 逆转录病毒载体 包装细胞 |
| 文章编号： | 1003-403X(2004)04-0241-03 |
Construction of Jak3(AC)Gene Recombination Retroviral Vector and Expression in NIH3T3 Cells |
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| Wang Rong,Huang Wenfang,Zhang Ping,et al.Construction of Jak3(AC)Gene Recombination Retroviral Vector and Expression in NIH3T3 Cells[J].Journal of Sichuan Continuing Education College of Medical Sciences,2004,23(4):241-243,275. |
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| Authors: | Wang Rong Huang Wenfang Zhang Ping |
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| Affiliation: | Wang Rong,Huang Wenfang,Zhang Ping,et alDepartment of Laboratory of People's Hospital of Sichuan Province,Chengdu city,Sichuan Province,610041,china |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Jak3 Dominant negative molecule Retroviral vector Incasing cell |
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