| 鸭疫里默氏杆菌RecA作为一种内参蛋白的评价 |
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| 引用本文： | 廖何斌,刘马峰,程安春.鸭疫里默氏杆菌RecA作为一种内参蛋白的评价[J].中国生物工程杂志,2015,35(6):26-31. |
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| 作者姓名： | 廖何斌 刘马峰 程安春 |
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| 作者单位： | 1. 四川农业大学预防兽医研究所 成都 611130;
2. 四川农业大学动物医学院禽病防治中心 雅安 625014;
3. 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室 成都 611130 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31302131)、高等学校博士学科点专项科研基金(20135103120006)、中国博士后基金(2014M552378) 资助项目 |
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| 摘 要： | 由于缺少适合的内参蛋白,所以用Western blot的方法来研究鸭疫里默氏杆菌蛋白表达的调节尚未见报道。以鸭疫里默氏杆菌基因组为模板,PCR扩增含有组氨酸标签His-tag的rec A基因和截段的rec AP基因,并分别将其克隆于原核表达载体p ET32a。将重组质粒转化到表达菌Rosetta中,经1mmol/L的IPTG诱导进行蛋白质表达。用组氨酸标签亲和试剂镍-琼脂糖进行重组蛋白质的纯化。用纯化的重组蛋白对4周龄的昆明鼠进行免疫,制备多克隆抗体。Western blot实验表明,截段表达的Rec AP的多克隆抗体血清比全长Rec A蛋白的多克隆抗体血清与鸭疫里默氏杆菌总蛋白反应更特异;在铁离子限制性环境和血红素丰富环境中培养的鸭疫里默氏杆菌的Rec A蛋白表达量一致。因此,鸭疫里默氏杆菌的Rec A蛋白可以在铁离子和血红素代谢等研究中作为Western blot的内参蛋白。
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| 关 键 词： | 鸭疫里默氏杆菌 内参蛋白 RecA蛋白 多克隆抗体 蛋白免疫印迹 |
| 收稿时间： | 2015-01-05 |
The Assessment of RecA Acted as an Internal Reference Protein in R. anatipestifer |
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| LIAO He-bin,LIU Ma-feng,CHENG An-chun.The Assessment of RecA Acted as an Internal Reference Protein in R. anatipestifer[J].China Biotechnology,2015,35(6):26-31. |
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| Authors: | LIAO He-bin LIU Ma-feng CHENG An-chun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | R anatipestifer Internal reference protein RecA protein Polyclonal antibody Western blot |
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