| 基于易错PCR的假密环菌Armillariella tabescens MAN47β-甘露聚糖酶耐高温定向进化 |
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| 引用本文： | 吕晓慧,胡亚冬,胡凤娟,刘大岭,姚冬生.基于易错PCR的假密环菌Armillariella tabescens MAN47β-甘露聚糖酶耐高温定向进化[J].生物工程学报,2009,25(12). |
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| 作者姓名： | 吕晓慧 胡亚冬 胡凤娟 刘大岭 姚冬生 |
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| 作者单位： | 暨南大学微生物技术研究所,广州,510632 |
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| 摘 要： | 本研究利用易错PCR技术突变假密环菌Armillariella tabescens MAN47β-甘露聚糖酶野生型基因,PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYCα上连接,在大肠杆菌DH5α中扩增后电转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,构建了库容为10_4的初级突变体库,筛选得到耐高温最佳突变株M262.DNS法测得80℃处理30 min后最大酶活力为25 U/mL,较之野生型最适条件酶活力提高了4.3倍.序列分析表明,突变体有3个碱基发生了突变:T343A/C827T/T1139C,相应的氨基酸改变为Ser115Thr/Thr276Met/Val380Ala,利用SWISS-MODEL数据库同源建模显示,这3个突变氨基酸分别位于第4个13折叠的第6个氨基酸、第6个α螺旋的第1个氨基酸、第10个α螺旋和第11个β折叠之间的转角.
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| 关 键 词： | 定向进化 β-甘露聚糖酶 易错PCR 热稳定性 |
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