西尼罗病毒E蛋白结构域Ⅲ在昆虫S2细胞中的表达与鉴定 |
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引用本文: | 史利军,吕茂民,黎诚耀,孙卫华,章金刚.西尼罗病毒E蛋白结构域Ⅲ在昆虫S2细胞中的表达与鉴定[J].中国兽医学报,2008,28(11). |
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作者姓名: | 史利军 吕茂民 黎诚耀 孙卫华 章金刚 |
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作者单位: | 1. 华中农业大学,动物医学院,湖北,武汉,430070;军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850 2. 军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850 3. 南方医科大学,生物技术学院,广东,广州,510515 |
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基金项目: | 解放军医药卫生科研项目 |
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摘 要: | 根据GenBank中发表的西尼罗病毒(WNV)E domainⅢ基因序列设计1对引物,用PCR方法扩增domainⅢ基因片段,回收目的基因片段定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5,构建重组表达载体pMT-DⅢ。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-DⅢ。提取S2-DⅢ细胞的基因组DNA,用PCR方法检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,研究成功构建了重组表达载体pMT-DⅢ,转染细胞经12mg/L的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达WNV E do-mainⅢ蛋白的果蝇S2细胞株。
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关 键 词: | 西尼罗病毒 E蛋白 结构域Ⅲ S2细胞 |
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