| ABCE1特异性siRNA慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 任翼,刘永煜,郭微,田大力.ABCE1特异性siRNA慢病毒载体的构建与鉴定[J].辽宁医学杂志,2010,24(2):64-66. |
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| 作者姓名： | 任翼 刘永煜 郭微 田大力 |
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| 作者单位： | 1. 辽宁省肿瘤医院胸外科,110042
2. 中国医科大学第四临床学院胸外科 |
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| 摘 要： | 目的构建并鉴定ABCE1基因短发夹状干扰RNA（shRNA）慢病毒载体,以便进一步研究ABCE1的功能。方法针对已经筛选确定的ABCE1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经BamHⅠ和HindⅢ酶切后的pRNAT-U6.1/GFP载体连接、转化,产生pLV-sh-ABCE1慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLV-sh-ABCE1、pHelper 1.0和pHelper 2.0 3种质粒共转染包装细胞人胚肾293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功构建ABCE1shRNA的慢病毒载体pLV-sh-ABCE1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108TU/ML。结论成功构建ABCE1基因shRNA慢病毒载体,为应用RNAi研究ABCE1功能奠定基础。
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| 关 键 词： | ABCE1 慢病毒载体 RNAi |
Construction and identification of ABCE1 specific siRNA lentiviral vector |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ABCE1 RNAi |
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