禽腺病毒流行株FAdV-4-AH-F41的分子特征及对细胞因子的诱导作用

【目的】分析1株血清4型禽腺病毒（FAdV-4）流行株的分子特征及其感染对细胞因子的影响。【方法】采集安徽省某禽类养殖场疑似心包积水 肝炎综合症的鸡肝脏组织样本，用鸡肝癌细胞（LMH）对病原进行分离，采用PCR、透射电镜（TEM）观察和间接免疫荧光试验（IFA）对分离的毒株进行鉴定。采用分段扩增后拼接的方法克隆分离毒株的全基因组，对其进行遗传进化分析和序列重组分析。基于柯赫法则，用分离毒株接种无特定病原体（SPF）鸡，检验其致病性。采用实时荧光定量PCR法，检测分离毒株对LMH细胞天然免疫相关细胞因子环鸟苷酸-腺苷酸（cGAS）、干扰素刺激因子（STING）、白介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8、干扰素-α（IFN-α）、IFN-β、干扰素调节因子7（IRF7）、线粒体抗病毒信号蛋白（MAVS）、主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ-α、MHCⅡ-β等11种细胞因子的诱导作用。【结果】分离鉴定到1株FAdV，其在LMH细胞中培养未出现明显细胞病变效应；病毒粒子直径为70~90 nm，符合FAdV-4的结构特征；免疫荧光试验结果显示，在接种分离毒株的LMH细胞内可观察到亮红色荧光，而对照细胞没有荧光；将该毒株命名为FAdV-4-AH-F41。采用分段扩增后拼接的策略获得了FAdV-4-AH-F41全基因组序列（43 708 bp）；遗传进化分析和序列重组分析发现，FAdV-4-AH-F41与FAdV-4株核苷酸相似性为99.6%；存在3个重组事件，第1个重组事件发生在30 453-30 674 bp，第2个发生在36 884-36 988 bp，第3个发生在43 401-43 715 bp。致病性试验显示，FAdV-4-AH-F41是导致鸡心包积水-肝炎综合症的病原。实时荧光定量PCR检测结果显示，与对照（DMEM/F12处理）相比，用FAdV-4-AH-F41处理后LMH细胞中11种免疫因子的表达量水平均有提升，其中cGAS、IL-6、IRF7、MHCⅡ β差异达极显著水平（P<0.01），IL-1β、IFN-α、MAVS差异达显著水平（P<0.05），STING、IL-8、IFN-β、MHCⅠ-α差异不显著。【结论】成功分离1株重组血清4型禽腺病毒，感染LMH细胞会诱导强烈的天然免疫反应。