| 血管内皮生长因子165真核基因转染载体转染的骨骼肌细胞☆ |
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| 引用本文： | 董刚,郑建金,李涛,徐欣,卢恕来,吴鸿.血管内皮生长因子165真核基因转染载体转染的骨骼肌细胞☆[J].中国组织工程研究与临床康复,2012,0(37):6897-6901. |
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| 作者姓名： | 董刚 郑建金 李涛 徐欣 卢恕来 吴鸿 |
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| 作者单位： | 1. 山东大学口腔医学院,山东省济南市 250012
2. 青岛市市立医院,山东省青岛市266011 |
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| 摘 要： | 背景:血管内皮生长因子基因转染治疗组织损伤的研究倍受关注,构建稳定可靠的人血管内皮生长因子真核表达载体有重要意义.目的:克隆人血管内皮生长因子基因血管内皮生长因子165片段,构建 pcDNA4-HisMax-C/VEGF165真核表达质粒,并验证其转染大鼠骨骼肌细胞的可靠性.方法:采用反转录-聚合酶链反应技术,从人卵巢癌患者外周血中提取并扩增出血管内皮生长因子165基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA4-HisMax-C真核表达载体上,构建成pcDNA4-HisMax-C/VEGF165重组质粒,聚合酶链反应扩增,分别用酶切电泳分析和 DNA 测序的方法对提取和重组 DNA 进行鉴定.pcDNA4-HisMax-C/VEGF165重组质粒转染骨骼肌细胞1周后反转录-聚合酶链反应提取血管内皮生长因子基因并酶切电泳鉴定.结果与结论:构建的重组质粒目的基因片段为人血管内皮生长因子165 cDNA,对大鼠骨骼肌细胞转染后检测到血管内皮生长因子165基因片段.提示成功地克隆了血管内皮生长因子165基因并构建了其真核表达质粒,能以此为载体转染至骨骼肌细胞,并已整合到骨骼肌的基因组参与转录,证明了其转染的有效性.
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| 关 键 词： | 血管内皮生长因子 真核表达载体 基因克隆 基因扩增 基因转染 |
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