miR-135a-5p靶向抑制Kif3B调控小鼠腭胚突间充质细胞的自噬 |
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作者姓名: | 冯文宣 廉舒博 王哲 陈靖 何苇 |
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作者单位: | 1. 遵义医科大学,口腔医学院;2. 遵义医科大学附属口腔医院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(82160176),项目负责人:何苇; |
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摘 要: | 背景:研究表明,在地塞米松诱导腭裂的小鼠胚胎腭突间充质细胞中miR-135a-5p呈高表达,初级纤毛及其介导的Shh信号通路参与小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。由此猜测miR-135a-5p可能通过初级纤毛及其介导的Shh信号途径调控小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。目的:探讨miR-135a-5p对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的调控作用。方法:体外提取并培养C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞。细胞转染分别设置为:(1)对照组、miR-135a-5p阴性对照组、miR-135a-5p模拟物组。(2)NC+miR-NC组、KIF3B过表达组、miR-135a-5p+KIF3B组。qRT-PCR验证miR-135a-5p、KIF3B的转染效率;透射电镜观察各组细胞中自噬小体/自噬溶酶体的数目;免疫荧光技术测定自噬标记物LC3B的荧光表达程度;Western blot检测KIF3B、LC3和P62的蛋白表达。(3)miR-135a-5p阴性对照组、SAG处理组、SAG+miR-135a-5p组。qRT-PCR检测Shh信号下游关键转录因子Gli3的mRNA表达水平;Western blot检测自...
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关 键 词: | 自噬 胚胎腭突间充质细胞 miRNA KIF3B Shh信号通路 腭裂 |
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