牛轮状病毒TaqMan实时荧光RT-PCR 快速检测方法的建立 |
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引用本文: | 范晴,谢芝勋,刘加波,庞耀珊,邓显文,谢志勤,谢丽基,彭宜.牛轮状病毒TaqMan实时荧光RT-PCR 快速检测方法的建立[J].中国畜牧兽医,2011,38(4):105-108. |
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作者姓名: | 范晴 谢芝勋 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 彭宜 |
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作者单位: | 广西兽医研究所,广西南宁 530001 |
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基金项目: | 国家百千万人才工程人选专项资金资助,广西科技攻关与新产品试制项目 |
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摘 要: | 本研究按照牛轮状病毒(BRV)结构蛋白VP6基因序列,设计合成引物和探针,经各反应条件的优化,建立了BRV TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术。对BRV进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,TaqMan实时荧光RT-PCR最低可检测到100个拷贝病毒RNA;与牛病毒性腹泻病毒(BVD)、猪瘟病毒(CSFV)、牛结核杆菌(MB)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)不发生交叉反应;所制作的标准曲线在102~109拷贝/μL浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.997;与常规的RT-PCR相比,该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。可对样品中微量BRV进行准确检测,对BRV的诊断有重要意义。
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关 键 词: | 牛轮状病毒 TaqMan实时荧光定量PCR 检测 |
收稿时间: | 2010-09-16 |
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