miR-124-3p经Wnt通路因子Axin1调控骨髓间充质干细胞的研究

目的 探讨miR-124-3p经Wnt通路因子A(Axin1)对骨髓间充质干细胞（BMSCs）的分子靶向机制及调节BMSCs的成骨分化进而参与绝经后骨质疏松（PMOP）的形成。方法 收集20例股骨骨折需要手术并扩髓或暴露髓腔的患者，10例绝经后骨质疏松妇女（PMOP组）和10例非骨质疏松的绝经后妇女（对照组），术中取骨髓组织3~5 mL，建立体外BMSCs细胞模型，用流式细胞仪检测BMSCs标志物，将BMSCs诱导分化为成骨细胞，RT-qPCR法检测miR-124-3p的表达。双荧光素酶报告基因系统检测miR-124-3p结合位点A-Axin1。构建miR-124-3p过表达载体，miR-124-3p过表达转染PMOP-BMSCs同时更换成骨诱导培养基进行成骨诱导培养。诱导第7、14、21 天 分别收集细胞进行检测碱性磷酸酯酶染色（ALP）和茜素红染色。成骨诱导第7天，RT-qPCR检测各组BMSCs中Runx2、Osterix靶因子Axin1的表达。Western Blotting检测miR-124-3p转染BMSCs后的表达与Axin1关系。结果 ①RT-qPCR法检测miR-124-3p的表达，PMOP组低于对照组。②miR-124-3p过表达转染、成骨诱导，随着诱导时间的延长，细胞培养液中ALP水平逐渐上升，茜素红染色可见结节沉积逐增加。③RT-qPCR检测成骨诱导第7天，Runx2和Osterix的表达，BMSC+成骨分化液组明显高于BMSC组，BMSC+过表达miR-124-3p组较其对照组明显上升；Axin1的表达，BMSC+成骨分化液组明显低于BMSC组，BMSC+过表达miR-124-3p组较其对照组显降低。④荧光素酶报告基因实验证明了miR-124-3p与Axin1的可结合性。⑤Western Blotting检测BMSCs，miR-124-3p过表达组Axin1表达显著下降，而miR-124-3p抑制组Axin1表达显著升高。结论 miR-124-3p可通过Wnt通路靶点Axin1调节BMSCs的成骨分化进而参与PMOP的形成。

The study of miR-124-3p regulating bone marrow mesenchymal stem cells via Wnt pathway factor Axin1