| 抗恙虫病东方体噬菌体抗体库的构建和初步筛选 |
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| 引用本文： | 黄会,詹希美,郑小英,吴瑜,何蔼,李卓雅,程梅,尹应先,张豪.抗恙虫病东方体噬菌体抗体库的构建和初步筛选[J].热带医学杂志,2008,8(3):241-244. |
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| 作者姓名： | 黄会 詹希美 郑小英 吴瑜 何蔼 李卓雅 程梅 尹应先 张豪 |
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| 作者单位： | 1. 中山大学中山医学院寄生虫学教研室,广州,510080;海口市人民医院,中南大学湘雅医学院附属注射器医院检验科,海口,570208
2. 中山大学中山医学院寄生虫学教研室,广州,510080 |
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| 摘 要： | 目的 构建抗恙虫病东方体噬菌体抗体库并进行初步筛选,获得与恙虫病东方体膜抗原特异性结合的抗体克隆,为研制恙虫病的快速诊断试剂盒奠定基础.方法 从感染恙虫病东方体小鼠的脾细胞中提取RNA,经逆转录、PCR扩增出抗体轻链和重链基因,将轻链基因和表达载体pComb3进行酶切、连接.转化大肠杆菌XL1-blue,构建轻链库;再对轻链重组质粒和重链Fd基因进行酶切、连接,转化大肠杆菌XL1-blue,构建组合文库,以辅助噬菌体VCS M13进行超感染.用恙虫病东方体56 kDa型特异性抗原作为筛选抗原,进行4轮富集筛选后用ELISA法进行阳性克隆的鉴定.结果 构建了库容为3.46×106的鼠源性抗恙虫病东方体的噬菌体Fab片段抗体库.经过4轮富集筛选,抗体库中的目的 抗体得以富集约160倍,并用ELISA法对其进行鉴定,得到了7个阳性克隆.结论 构建的抗恙虫病东方体噬菌体抗体库,库容为3.46×106,滴度为2.5×1012 cfu/ml,基本上达到了建库要求,能够满足多样性的需求,并成功的筛选出抗恙虫病东方体56 kDa蛋白的抗体,用过氧化物酶标记的抗M13抗体进行了初步鉴定,认为具有一定的特异性.
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| 关 键 词： | 恙虫病东方体 噬菌体抗体库 |
| 文章编号： | 1672-3619(2008)03-0241-03 |
| 修稿时间： | 2007年10月17 |
Construction and Preliminary Screening of Phage-Displayed Antibody Library against Orientia tsutsugamushi |
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| HUANG Hui,ZHAN Xi-mei,ZHENG Xiao-ying,WU Yu,HE Ai,LI Zhuo-ya,CHENG Mei,YIN Ying-xian,ZHANG Hao.Construction and Preliminary Screening of Phage-Displayed Antibody Library against Orientia tsutsugamushi[J].Journal Of Tropical Medicine,2008,8(3):241-244. |
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| Authors: | HUANG Hui ZHAN Xi-mei ZHENG Xiao-ying WU Yu HE Ai LI Zhuo-ya CHENG Mei YIN Ying-xian ZHANG Hao |
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