| 稳定敲除CACYBP/SIP基因的 MCF-7细胞株的构建及其细胞增殖的变化 |
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| 引用本文： | 王会峰,赵志军,王燕,吴媛媛,王宁菊.稳定敲除CACYBP/SIP基因的 MCF-7细胞株的构建及其细胞增殖的变化[J].基础医学与临床,2019,39(12). |
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| 作者姓名： | 王会峰 赵志军 王燕 吴媛媛 王宁菊 |
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| 作者单位： | 宁夏医科大学总医院 肿瘤医院肿瘤内科,宁夏 银川,750004;宁夏医科大学总医院 医学实验中心,宁夏 银川,750004 |
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| 摘 要： | 目的利用CRISPR/Cas9系统构建CACYBP-/-乳腺癌MCF-7基因缺陷细胞株,并研究该基因敲除株对细胞增殖能力的影响。方法设计特异sgRNA序列,构建Lenti-CAS9-sgRNA-puro质粒,转染MCF-7细胞,puromycin抗性筛选,Cruiser检测sgRNA活性,极限稀释法筛选单克隆株,Western blot检测CACYBP/SIP蛋白的表达,Brdu和MTT试剂盒检测CACYBP/SIP缺失后细胞增殖能力。结果成功构建Lenti-CAS9-sgRNA-puro质粒,puromycin最佳筛选浓度为0. 9μg/m L,sgRNA1活性最高,获得的单克隆系测序唯一敲除CACYBP/SIP的MCF-7细胞株增殖能力减弱(P0. 05)。结论敲除CACYBP/SIP的MCF-7细胞株增殖能力减弱。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9系统 CACYBP/SIP MCF-7细胞 |
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