| 四环素调控系统修饰永生化大鼠星形胶质细胞株的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 田学愎,田玉科,徐颖,高峰,杨辉,安珂.四环素调控系统修饰永生化大鼠星形胶质细胞株的构建及鉴定[J].中华麻醉学杂志,2006,26(3):265-268. |
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| 作者姓名： | 田学愎 田玉科 徐颖 高峰 杨辉 安珂 |
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| 作者单位： | 1. 430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉教研室
2. 中山大学附属第一医院麻醉科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30471660）;杨森基金;湖北省卫生厅科研基金资助项目（Jx2B07） |
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| 摘 要： | 目的构建四环素及其衍生物强力霉素诱导表达目的基因的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法用脂质体法将逆转录病毒载体四环素调控系统中的质粒pRevTet-On转染病毒包装细胞 PT67,经筛选培养后获得病毒载体RevTet-On,采用RT-PCR进行鉴定,并应用NIH313细胞测定病毒滴度。将RevTet-On感染永生化大鼠星形胶质细胞,用有限稀释法挑选阳性细胞单克隆后扩大培养,每个克隆瞬时转染含萤光素酶报告基因的质粒pRevTRE-Lue,加入强力霉素48h后分别检测其萤光素酶活性值,挑选出强力霉素诱导表达高、背景表达低的细胞株并检测其诱导表达的时效、量效关系。结果 RT-PCR结果显示逆转录病毒包装成功,病毒最高滴度为7．4×105CFU／ml。RevTet-On转染永生化大鼠星形胶质细胞后挑选出48个单克隆,瞬时转染pRevTER-Luc后筛选出1株高表达低背景细胞株, 其诱导表达值为876．1 RLU,背景表达值为42．5 RLU,诱导倍数为20．6。该细胞株在加入诱导因子强力霉素1 h后目的基因即开始表达,在24 h时达到高峰,在强力霉素浓度100-2 000 ng/ml的范围内, 其诱导表达活性与药物浓度呈剂量依赖性。结论含四环素调控系统的永生化大鼠星形胶质细胞株诱导活性可靠,可用于调控表达外源基因的研究。
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| 关 键 词： | 四环素 基因表达调控 抗原 多瘤病毒转化 星形细胞 |
| 收稿时间： | 09 20 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 2005-09-20 |
Establishment and identification of tetracycline controlled gene inducible system in immortalized rat astrocyte strains |
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| TIAN Xue-bi,TIAN Yurke,XU Ying,et al..Establishment and identification of tetracycline controlled gene inducible system in immortalized rat astrocyte strains[J].Chinese Journal of Anesthesilolgy,2006,26(3):265-268. |
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| Authors: | TIAN Xue-bi TIAN Yurke XU Ying |
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| Affiliation: | TIAN Xue-bi,TIAN Yurke,XU Ying,et al. Department of Anesthesiology,Tongji Hospital of Tongji Medical College,Huazhong University of Science & Technology,Wuhan 430030,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tetracycline Gene expression regtdatinn Antigens polyomavirus transforming Astrocytes |
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