酪蛋白抗凝血肽的分离纯化及其抗凝血活性测定

目的 本论文采用复合酶解法制备酪蛋白抗凝血肽，然后对其进行了分离及抗凝血活性测试。方法 本实验通过比较混合酶解和复合酶解酪蛋白的水解液活性，获得抗凝血活性最高的组合，为“菠萝蛋白酶+胰蛋白酶+中性蛋白酶+木瓜蛋白酶”复合酶解酪蛋白组。然后选择截留分子量为1 kD和3 kD的超滤膜对抗凝血活性最高的组合进行超滤，实验结果表明截留分子量为1 kD的超滤浓缩液抗凝血活性最高。结果 超滤浓缩液进行抗凝血实验，实验结果表明，兔血︰1 kD浓缩液(V︰V)=6︰4和兔血︰1kD浓缩液(V︰V)=1︰1组合都是48 h后血液没有凝固；体外溶栓实验表明，置于浓缩液中的血栓条24 h后红色褪去，证明1 kD超滤浓缩液具有较好的溶栓和抗凝血作用。1 kD超滤浓缩液进行脱盐，然后采用凝胶渗透色谱法进行分子量分布测定，由数据分析可知分子量主要集中在500～180、1 000～500、2 000～1 000范围。结论 按照本实验方法制备的酪蛋白抗凝血肽具有较好的溶栓和抗凝血作用。

Separation and purification of casein anticoagulant peptide and determination of its anticoagulant activity