轻度增高的游离脂肪酸与脂多糖协同抑制中性神经酰胺酶诱导INS?1细胞凋亡及胰岛素分泌异常的机制

目的：探讨轻度增高的游离脂肪酸与脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）协同对大鼠胰岛β细胞株INS?1凋亡及胰岛素分泌的影响及机制。方法：采用0.125 mmol/L棕榈酸和不同浓度的LPS（1、10、50 ng/mL）单独、联合作用INS?1细胞24 h，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测Cleaved caspase?3表达；棕榈酸和LPS（50 ng/mL）单独或联合刺激INS?1细胞24 h后，HPLC法检测中性神经酰胺酶（neutral ceramidase，NCDase）活性，ELISA法检测胰岛素分泌功能；并观察转染pEGFP?C3?NCDase重组质粒后，棕榈酸和LPS刺激的INS?1细胞凋亡率及胰岛素分泌功能的改变。结果：与对照组相比，棕榈酸或LPS（50 ng/mL）单独处理，对INS?1细胞凋亡及胰岛素分泌无明显影响，但两者联合可明显增加凋亡率及Cleaved caspase?3表达（P < 0.05）。棕榈酸联合LPS作用24 h后明显抑制基础胰岛素分泌（P < 0.01），对细胞内胰岛素含量及葡萄糖刺激的胰岛素分泌无影响。此外，棕榈酸或LPS单独刺激不影响INS?1细胞NCDase，两者联合则显著抑制其活性（P < 0.01）；而高表达NCDase能明显缓解棕榈酸联合LPS诱导的凋亡和基础胰岛素分泌减少（P < 0.05）。结论：轻度增高的游离脂肪酸联合LPS可通过抑制鞘脂信号分子代谢的关键酶——NCDase活性，促进胰岛β细胞凋亡并抑制基础胰岛素分泌。