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| miR-195重组腺病毒表达载体构建及在细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 张浩明,付汉江,铁轶,朱捷,邢瑞云,汪成富,郑晓飞.miR-195重组腺病毒表达载体构建及在细胞中的表达[J].军事医学科学院院刊,2008,32(4). |
| 作者姓名： | 张浩明 付汉江 铁轶 朱捷 邢瑞云 汪成富 郑晓飞 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850;苏州大学生命科学学院,苏州,215123 2. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850 3. 苏州大学生命科学学院,苏州,215123 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家重大科学研究计划项目 |
| 摘 要： | 目的:利用AdEasy系统构建miR-195的腺病毒表达载体,为研究miR-195的功能提供条件.方法:将miRNA-195前体序列从已构建的pcDNA-miR-195载体中克隆进穿梭载体pAdTrack-CMV,通过与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中高效同源重组,获得完整的重组腺病毒质粒.利用HEK293细胞包装并扩增重组腺病毒Ad-195.Ad-195感染肺癌细胞A549后,利用miRNA的定量RT-PCR技术检测Ad-195在细胞中表达miR-195情况.随后荧光素酶报告基因实验证明,Ad-195表达的miR-195能够作用于BCL2基因上预测的miR-195靶位点.结果:实时定量PCR检测显示,Ad-195感染肺癌细胞A549后,miR-195表达水平有显著的上调.结论:miR-195的腺病毒表达载体构建成功,能够用于在细胞内过表达具有生物学功能的miR-195. |
| 关 键 词： | 微RNA 基因表达 腺病毒科 质粒 |
Construction of miR-195 recombinant adenovirus vector that expresses miR-195 in cells |
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| ZHANG Hao-Ming,FU Han-Jiang,TIE Yi,ZHU Jie,XING Rui-Yun,WANG Cheng-Fu,ZHENG Xiao-Fie.Construction of miR-195 recombinant adenovirus vector that expresses miR-195 in cells[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2008,32(4). | |
| Authors: | ZHANG Hao-Ming FU Han-Jiang TIE Yi ZHU Jie XING Rui-Yun WANG Cheng-Fu ZHENG Xiao-Fie |
| Affiliation: | ZHANG Hao-Ming1,2,FU Han-Jiang1,TIE Yi1,ZHU Jie1,XING Rui-Yun1,WANG Cheng-Fu2*,ZHENG Xiao-Fie1*(1.Institute of Radiation Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850,China,2.College of Life Science,Suzhou University,Suzhou 215123,China) |
| Abstract: | Objective:To construct a recombinant adenovirus vector containing miR-195 using AdEasy System for further research on the function of miRNA-195.Methods:The sequence of pri-miR-195 was first cloned into the shuttle vector pAdTrack-CMV.The recombinant shuttle vector was co-transformed into E.coli.BJ5183 cells with an adenoviral backbone plasmid pAdEasy-1 to generate the recombinant plasmid Ad-195.The linearized Ad-195 was packed and amplified in human embryonic kidney 293(HEK293) cells.A549 cells were infecte... |
| Keywords: | miR-195 A549 |
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