黄精丸对D-半乳糖和冈田酸所致学习记忆障碍小鼠海马Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的 探讨黄精丸对D-半乳糖和冈田酸所致学习记忆障碍造模的阿尔茨海默病（AD）小鼠海马Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白表达的影响，探讨其相关的作用机制。方法 采用小鼠颈背部皮下注射1.0% D-半乳糖液（0.14 g·kg^-1·d^-1，连续4周）后，再右侧脑室一次性注射冈田酸2 μL（75 ng），制作小鼠AD模型，经Morris水迷宫检测挑选造模成功的AD小鼠，再随机分为AD模型组，美金刚组（1.3×10^-3 g·kg^-1·d^-1），黄精丸组（2.5 g·kg^-1·d^-1），另设假手术组和正常组；同时点给假手术组的小鼠右侧脑室一次性注射生理盐水2 μL处置作造模对照。造模2周后给两实验药物组小鼠灌胃相应剂量的试验药物，持续4周；另外，AD造模2周后，同时给假手术组及AD模型组小鼠每天灌胃等量生理盐水，持续4周；正常组小鼠无特殊处理。灌胃结束后，采用穿梭实验检测各组小鼠学习、记忆水平的区别；免疫组化检测各组小鼠海马CA1区β-catenin及糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）阳性神经元数量改变；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组小鼠海马GSK-3β，β-catenin，细胞周期蛋白D₁（CyclinD₁） mRNA表达差异；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠海马总GSK-3β（t-GSK-3β），Ser9位磷酸化GSK-3β（p-Ser9-GSK-3β），Tyr216位磷酸化GSK-3β（p-Tyr216-GSK-3β），总β-catenin（t-β-catenin），磷酸化β-catenin（p-β-catenin）和CyclinD₁蛋白表达变化。结果 与正常组比较，AD模型组小鼠痴呆症状较明显，学习与记忆成绩明显降低，海马CA1区β-catenin免疫阳性神经元数量、海马t-β-catenin与CyclinD₁ mRNA及蛋白表达水平，p-Ser9-GSK-3β蛋白水平，p-Ser9-GSK-3β/t-GSK-3β及p-Tyr216-GSK-3β/t-GSK-3β值显著降低（P<0.01），海马CA1区GSK-3β免疫阳性神经元数量、海马t-GSK-3β mRNA及蛋白表达水平，p-Tyr216-GSK-3β及p-β-catenin蛋白水平，p-β-catenin/t-β-catenin值均显著升高（P<0.01）。与AD模型组比较，黄精丸组小鼠痴呆症状显著改善，学习与记忆成绩明显提高，海马CA1区β-catenin免疫阳性神经元数量、海马t-β-catenin，CyclinD₁ mRNA及蛋白表达水平，p-Ser9-GSK-3β蛋白水平，p-Ser9-GSK-3β/t-GSK-3β值均显著升高（P<0.01），海马CA1区GSK-3β免疫阳性神经元数量、海马t-GSK-3β的mRNA及蛋白表达水平，p-Tyr216-GSK-3β及p-β-catenin蛋白水平，p-β-catenin/t-β-catenin值均显著下降（P<0.01），但p-Tyr216-GSK-3β/t-GSK-3β值无明显统计学差异。结论 黄精丸可下调AD小鼠海马t-GSK-3β表达并降低其蛋白活性，上调t-β-catenin表达并增加其蛋白活性，进而使下游CyclinD₁表达增强，促进目的基因转录，发挥治疗AD作用，其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。