基于多元统计分析的银杏叶提取物中有机酸类成分含量研究

目的建立HPLC法测定银杏叶提取物中9种小分子有机酸类成分莽草酸、儿茶素、表儿茶素、没食子酸、原儿茶酸、6-羟基犬尿喹啉酸、对羟基苯甲酸、对羟基肉桂酸、咖啡酸含量的方法,并结合多元统计分析方法比较不同厂家生产的银杏叶提取物间质量差异。方法采用Inertsil ODS-3 C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,波长切换测定(220 nm检测莽草酸、儿茶素、表儿茶素,254 nm检测没食子酸、原儿茶酸、6-羟基犬尿喹啉酸、对羟基苯甲酸,310 nm检测对羟基肉桂酸、咖啡酸),柱温40℃。结果不同厂家生产的银杏叶提取物中有机酸总含量有差异,厂家内部样品中各有机酸含量同样存在差异。经聚类分析、主成分分析、相关与回归分析等多元统计方法分析,筛选出儿茶素、没食子酸、原儿茶酸及6-羟基犬尿喹啉酸为体现样品质量差异的特征成分,同时成分间具有内在相关性。结论建立的方法操作简便、重复性好、结果可靠,可用于银杏叶提取物中有机酸类成分的质量评价。筛选出的儿茶素、没食子酸、原儿茶酸及6-羟基犬尿喹啉酸是体现质量差异的特征成分,又是具有内在关联的共性成分,为提升银杏叶提取物整体质量控制能力提供了依据,同时表明银杏叶提取物的提取工艺并不统一,企业内部工艺的稳定性也有待提高。     

去势比格犬腹部脂肪与相关血清学指标及骨密度的变化关系

目的通过建立去势比格犬模型,观察绝经早期腹部脂肪变化规律,并通过对脂肪与骨代谢相关血清学指标的测量与分析,探讨脂肪及骨代谢的关键影响因素。方法选取6只成年雌性比格犬进行去势术,分别在术前、术后4个月、6个月、10个月进行腰椎定量CT(quantatitive computed tomography,QCT)腹部脂肪面积、骨密度(bone mineral density,BMD)、MRI腰椎骨髓脂肪含量及血清学指标的检测,比较不同时间各指标的变化趋势及关系。结果比格犬腹内脂肪面积(visceral fat area,VFA)、皮下脂肪面积(subcutaneous fat area,SFA)、腹部总脂肪面积(total fat area,TFA)在术后6个月、10个月均增加(P0.05),术后10个月VFA增加百分比均值为84.39%,且为三者中最大;术后比格犬BMD并未明显降低。体重、BMD、瘦素(leptin,LP)、VFA、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)与SFA相关。SFA、体重、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、内脏脂肪素(visfatin,VFN)与BMD相关。结论去势比格犬模型可用于研究绝经后雌激素缺乏所引起的脂肪代谢变化,但短期内BMD并未明显丢失,骨、脂肪代谢之间存在交互作用。     

犬Oddi括约肌肌电的研究

目的探索能准确稳定记录犬Oddi括约肌(sphincter of Oddi,SO)肌电活动的新方法,并对记录到的肌电波形进行初步分析。方法用自行研制的黏膜接触式电极记录30只犬SO肌电活动,同时记录十二指肠和胃的肌电活动,分析SO肌电波形的规律以及和胃十二指肠肌电的关系。结果用我们的方法可以记录到犬SO的快波和慢波,同步记录以及切离实验证实记录到的波形是犬的SO肌电而不是来自十二指肠和胃。结论犬的SO肌电记录是可行的,犬SO快波和慢波的发现将对SO功能研究提供一个新的平台。     

血管内皮生长因子及炎性因子在油酸性犬急性呼吸窘迫综合征中的变化

目的探讨油酸性急性呼吸窘迫综合征（ARDS）beagle犬血浆及肺泡灌洗液血管内皮生长因子（VEGF）、可溶性细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）水平的改变。方法12只英国纯种beagle犬，静脉注射油酸0．15mL／kg，在注射油酸前、后1h，出现ARDS的典型表现时，抽血测VEGF、sICAM-1、IL-8、TNF—α，并对此时相作肺泡灌洗液VEGF、sICAM—1、IL-8、TNF-α的测定。结果beagle犬静脉注射油酸后1h血浆TNF—α升高（P〈0．05），血浆反肺泡灌洗液IL8、sICAM-1和VEGF在1h较油酸前没有明显变化（P〉0．05），beagle犬油酸型ARDS模型建立后血浆及肺泡灌洗液VECF、sICAM-1、IL-8、TNF—α均显著高于建模前（P〈0．05）。结论VEGF、sICAM-1、IL-8、TNF～α在beagle犬油酸型ARDS发生发展过程中可能均起重要作用，其水平的高低可能与ARDS严重程度及预后有关。     

犬MC1R基因多态性的研究

目的 利用PCR—RFLP和PCR—SSCP技术分别检测犬MC1R基因中两个序列T105A和R306Ter的基因多态性，为遗传育种、培育出更加优良的实验用犬奠定基础。方法 以224只犬为实验材料，对犬MC1R基因T105A片段和R306Ter片段分别进行PCR-RFLP和PCR—SSCP分析，并且分别对具有RFLP和SSCP多态性的片段进行克隆测序，找出等位基因的差异位点。结果 经对犬MClR基因的PCR-RFLP分析，发现犬MC1R基因的T105A序列具有多态性，表现为三种基因型：AA、AB和BB。通过对具有RFLP多态性的片段进行克隆测序发现MC1R基因在编码第105位氨基酸的密码子处存在由G到A的单碱基突变，该突变导致第105位氨基酸发生由精氨酸向苏氨酸的改变，此外在第207位氨基酸的密码子处还发现由A到G的单碱基突变，并产生了一个HhαI限制性内切酶位点。同时，经过犬MC1R基因的PCR—SSCP分析，发现犬MC1R基因的R306Ter序列具有多态性，表现为三种基因型：CC、CD、DD.通过对具有SSCP多态性的片段进行了克隆测序发现，MC1R基因在编码第306位氨基酸的密码子处存在一个由CGA到TGA的终止突变，而使翻译终止。结论 利用PCR—RFLP和PCR—SSCP分析技术证实犬MC1R基因具有明显的多态性。     

实验用Beagle犬正常血液学、生化学指标测定

用 ADVI全自动血液、生化分析仪对随机抽样的16 8条成年 Beagle犬血样进行血液、生化学指标测定 ,结果显示 ,成年雌雄犬间各项血液学、生化学指标均没有显著性差异。血液、生化指标与 15年以前统计资料相比 ,差异显著。这种差异一方面可能是饲养环境不断改善、营养平衡 ;另一方面可能是测定方法、仪器试剂的不断完善而引起的实验用Beagle犬正常血液学、生化学指标测定@姚菊芳$复旦大学实验动物科学部!上海200032 @朱成培$上海第一人民医院 @朱忠华$复旦大学实验动物科学部!上海200032 @杨萍$复旦大学实验动物科学部!上海200032B…     

犬双肺序贯性移植的研究

目的探讨犬双肺序贯性移植时供肺的采取及受体移植手术技巧。方法犬16条,体重差异<5%的随机配对作为供受体进行双肺序贯移植实验共8次,移植右肺钳夹左房时采用了‘v’钳夹技术,并检测左肺及右肺术后0.5、1、2 h各进行血气分析、肺水含量及电镜下超微结构,了解术后肺功能。结果移植右肺时采取的‘v’型钳夹术良好地解决了钳夹左房时因回心血量受阻而引起的心功能不全。术后检测结果表明移植后肺功能良好。结论掌握了犬双肺序贯性移植的全过程,"V"形双阻断钳夹左心房技术提高了犬肺移植的成功率。     

清醒Beagle犬安全药理心血管遥测系统验证研究

 目的 选用临床上报道的对QT间期延长有影响的2种阳性药和无影响的1种阴性药在符合GLP条件下对心血管遥测系统进行验证。方法 验证研究中，清醒Beagle犬分别静脉注射给予生理盐水(1 mL·kg^-1， iv， n=2)、卡托普利 (3 mg·kg^-1， iv，n=2)、特非那丁(3 mg·kg^-1， iv， n=2) 和索他洛尔 (10 mg·kg^-1， iv，n=2)。DSI遥测系统连续获取给予上述4种供试品后至少24 h数据，数据包括血压、心电图、心率等指标。DSI Ponemah ECG分析程序使用Fridericia心率校正公式对QT间期进行校正。结果 生理盐水对心血管参数没有明显的影响。卡托普利除导致心率显著增加和平均压下降外，对ECG参数无明显影响。特非那丁和索他洛尔在实验设计剂量下导致Beagle犬经心率校正的QT间期(QTcf)显著增加，增加大于10%。结论 实验数据显示，遥测系统能够检测到清醒Beagle犬中心血管功能的相关变化。在符合ICH安全药理S7B指南的条件下，遥测系统可用作药物所致QT间期延长的模型。
     

双侧无铆型房间隔缺损封堵器的实验研究

目的在犬房间隔缺损(ASD)模型上评价双侧无铆型ASD封堵器的疗效、安全性和生物相容性。方法自行设计封堵器是由镍钛合金丝编织成的网状结构,外形呈双盘状,其左房面平整,右房面中间凹陷,中央有与推送杆相接的连接袢,内衬有三层聚酯膜。犬ASD模型建立采用房间隔穿刺结合球囊扩张方法,模拟临床经导管封堵ASD过程,闭合人工制备的ASD。用心脏超声观察封堵器位置及封堵器对右、左房室瓣功能的影响。术后1、2、3、6个月分别处死动物行组织学检查,观察封堵器周围及表面的组织学反应。结果8条犬成功制作ASD模型并封堵,超声显示封堵器位置固定良好,不影响右、左房室瓣功能。各观察时间点肉眼见所有封堵器表面光滑均覆有薄层的新生内膜。3个月后封堵器表面完全内皮化,光镜和电镜检查显示封堵器置入部位周围组织无明显的炎症反应。6个月扫描电镜观察金属丝无腐蚀。HE染色显示肺、肝、脾、肾、胰等组织无血栓栓塞、炎症表现。结论双侧无铆型ASD封堵器操作简便、使用安全及有良好的生物相容性,提示自制的ASD封堵器将可安全地应用于临床。     

一种新型生物人工肝系统对急性肝衰竭犬的治疗效果

我们在构建了 1种新型生物人工肝(BAL)系统并建立了 1种犬急性肝衰竭(ALF)新模型的基础上 ,应用新型BAL系统对ALF犬进行治疗 ,以评价新型BAL对ALF犬提供肝支持作用的有效性和安全性。一、材料和方法1.ALF犬模型的制作 :杂种犬 2 5条 ,体重 10～ 15kg ,雌雄不限。行门腔分流及胆总管结扎切断术 ,术前、术后 14d采血 ,全自动生化仪测定ALT、AKP、TBi,干式生化分析仪测定氨 (NH3 ) ,HPLC测定支链氨基酸 /芳香氨基酸比(BCAA/AAA) [1] 。2 .猪肝细胞分离和培养 :中国实验用小型猪 5头 ,体重 7～ 9kg ,雌雄不限。采用原位胶原酶…