食品中单核细胞增生性李斯特氏菌PCR快速检测方法

为建立食品中单核细胞增生性李斯特氏菌 (单增李斯特氏菌 )的快速、敏感、特异的PCR检测方法 ,选取hlyA基因作为靶序列设计一对引物 ,用该引物对 6 3株从国内食品中分离的李斯特氏菌 (进行传统方法验证 )和 2 0株非李斯特氏菌进行PCR扩增 ,并用此方法对人工污染食品进行检测 ,扩增片段表现出极好的单增李斯特氏菌种特异性 ,人工污染的生肉、冷冻虾仁、卷心菜的检出限为 39cfu g ,为食品中单增李斯特氏菌的快速、敏感并且特异的检测方法。     

微量热法研究10-23脱氧核酶切割反应的热动力学

选用乙型肝炎病毒(HBV)前区C/C区2031位点的序列作为底物RNA片段,并合成相应的10-23脱氧核酶,然后用微量热法研究10-23脱氧核酶的热动力学。在近生理条件下,通过微量热法测定10-23脱氧核酶切割反应的热动力学参数。根据热流曲线得出底物RNA不同浓度的反应初速率v0,再作出v-[S]曲线,通过Lineweaver-Burk作图得出10-23脱氧核酶切割反应的最大速率vmax为2.5×10-9mol/(L ·s)、米氏常数Km为0.045nmol/L、催化常数Kcat为0.107min-1。     

抗乙型肝炎病毒基因治疗的若干进展

随着分子生物学特别是基因工程技术的发展,抗乙型肝炎病毒基因治疗有较深入的研究,利用基因重组、转基因及反义核酸等技术,在细胞水平或通过动物实验阶段的研究,基因有关治疗在抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制中的作用已被证实。本文对转基因干扰素、DNA 疫苗(DNA 免疫)、反义寡核苷酸、三螺旋形成寡核苷酸(反基因寡核苷酸)、核酶有关抗乙型肝炎病毒基因治疗的研究进行综述。     

脱氧核酶电化学生物传感器高灵敏测定铅离子

基于铅离子脱氧核酶对铅离子的特异性识别作用,研制了用于测定铅离子的高灵敏电化学生物传感器。该传感器以固定于电极表面、末端标记了电信号基团的脱氧核酶作为识别元素和信号探针。当传感界面与含有铅离子的溶液接触时,脱氧核酶的酶链在铅离子的辅助作用下将修饰了电信号基团的底物链切断并使其脱离电极表面,从而使电极表面电信号分子的电流减小,产生用于铅离子定量检测的电信号。在0.5~12.5μg/L的浓度范围内,检测信号与Pb~(2+)浓度呈良好的线性关系,Pb~(2+)的检出限为0.3μg/L。同时,该电化学生物传感器对Pb~(2+)的检测表现出良好的特异性和选择性。     

X射线衍射技术

核酶（核酶，ribozyme）能够完成合成新RNA分子所需的基本反应，加州大学研究人员最近确立了核酶的三维结构，为探索生命起源过程中首个具有自我进化能力的分子提供了参考。[第一段]     

DNA核酶的分类、筛选及主要应用的研究进展

DNA核酶是通过指数富集配体的系统进化技术（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX）筛选出来的具有催化活性的DNA分子。本文重点综述了DNA核酶的分类、筛选及主要应用。根据其催化作用方式，可将DNA核酶分为切割类、连接类、磷酸化类和其他类，其中切割类和连接类占的比例较大。目前DNA核酶的底物主要还是以核酸居多。DNA核酶的筛选主要是采用生物素-链霉亲和素法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法来分离有催化活性的DNA分子。目前DNA核酶在金属离子检测、基因治疗和DNA分子加密系统中都呈现出较好的应用前景。     

非标记脱氧核酶构象改变荧光法检测铀酰离子

在p H 5.5 MES缓冲溶液中,当体系中不存在铀酰离子时,SYBR GreenⅠ(SG)能通过嵌入和小沟结合方式与脱氧核酶作用,导致荧光增强;当铀酰离子存在时,脱氧核酶的r A碱基处断裂,游离出单链,此时SG与单链DNA作用减弱,荧光信号降低,且体系的荧光强度变化值与铀酰离子浓度在1.73×10-9⁴.40×10-8mol/L范围内呈良好线性关系,线性回归方程为ΔF=108.99C(×10-8mol/L)+79.22,相关系数r=0.990。根据空白管的标准偏差Sb和标准曲线的斜率k算出LOD为5.2×10-10mol/L。该方法简便、选择性好、灵敏度高。     

逆转录病毒靶向介导HDV核酶体外抑制HBV表达

目的包装携带HDV核酶的肝细胞靶向性逆转录病毒载体,并检测体外HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的影响。方法采用脂质体法,分别包装出携带针对HBV不同基因组区域的HDV核酶的肝细胞靶向性重组逆转录病毒,感染HepG2215细胞,ELISA及荧光定量PCR检测HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的抑制作用。结果pMSCV-U6-PreS2-Rz和pM-SCV-U6-C-Rz对乙型肝炎病毒表面抗原抑制率明显高于其他HDV核酶和对照组,分别达80%和85%,且高于脂质体转染介导的同种核酶对乙型肝炎病毒表面抗原表达的抑制率。结论靶向性重组逆转录病毒能够携带HDV核酶进入HepG2215细胞,并且对乙型肝炎病毒的表达有较高的抑制作用,为抗病毒治疗的研究奠定了基础。     

DNAzyme抑制H-ras基因表达的研究

目的研究DNAzyme特异切割H-ras mRNA的效率。方法针对H-ras mRNA序列,设计并合成了7个10-23DNAzyme,分别进行DNAzyme的细胞外酶切反应;通过荧光显微镜观察脂质体介导DNAzyme的转染效果,利用实时定量PCR、MTT法在细胞水平检测DNAzyme对H-ras基因表达的抑制。结果合成的7个10-23DNAzyme均可以细胞外近生理条件下对H-ras mRNA进行有效切割。利用LipofectamineTM可将荧光标记的DNAzyme No·1转染Hep-2细胞。转染后DNAzyme在细胞核及细胞质内均存在,且在细胞质中多位于核周围。实时定量PCR检测,DNAzyme No.1在转染后24h及48h能显著降低Hep-2细胞中H-ras RNA的含量,从而抑制ras基因的表达。利用MTT检测到DNAzyme No.1在转染Hep-2细胞24h及48h后对细胞增殖及分化均产生明显的抑制作用。结论DNAzyme在细胞内外均能够有效抑制H-ras基因的表达。     

脱氧核酶抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因的表达

目的 探讨抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因blaR1 表达的脱氧核酶对MRSA耐药性的影响。 方法 以耐药基因blaR1 的mRNA为靶点, 设计合成脱氧核酶DrzB, 导入细菌后通过平板克隆形成实验观察DrzB 对MRSA 细菌耐药性的影响, 通过RT-PCR 观察DrzB 对耐药基因blaR1表达的抑制作用。 结果 加入DrzB 后培养的MRSA,在含苯唑西林(6 mg·L^-1)的M-H 琼脂培养基表面生长的菌落单元计数低于对照组(P <0.01), blaR1的mRNA 表达水平也较对照组降低(P <0.01)。 结论 导入以blaR1 的mRNA 为靶基因的DrzB 阻断耐药基因表达, 可以部分恢复MRSA 的抗生素敏感性。脱氧核酶DrzB 是一种特异性的、有效的基因治疗剂。