白鲢肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶单域抗体文本库构建及淘选

鱼肉中的肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)在加工过程中可降解肌原纤维,引起鱼糜制品的凝胶劣化。一种新型特异性高的鲨源抗体——单域抗体(single-domain antib odies,sdAbs),能直接与抗原结合并抑制酶的活性。研究主要完成了针对MBSP单域抗体制备的前期工作:文本库建立及淘选过程,以克隆表达的MBSP为抗原免疫铰口鲨鱼(nurse shark,Ginglymostoma cirratum),构建鲨鱼单域抗体文本库,并从中淘选针对MBSP的特异性单域抗体噬菌粒,最终得到31个能与MBSP特异性结合的噬菌粒,为获得抗MBSP单域抗体鉴定了基础,以期抑制或消除MBSP的活性,解决现有鱼糜制品凝胶劣化的问题。     

甲巯咪唑致中国人群胰岛素自身免疫综合征的临床特点分析

目的:探讨中国人群甲巯咪唑致胰岛素自身免疫综合征（IAS）的临床特点。方法:收集1985年1月1日至2019年6月30日国内外期刊公开发表的中国人群甲巯咪唑致IAS病例文献，进行回顾性分析。结果:共统计95例甲巯咪唑致IAS患者，男性发病年龄早于女性，性别比为1∶2.31；服用甲巯咪唑30 mg/d后在1月至3月内发生IAS最多，主要在夜间及凌晨以神经性低血糖为首发症状，血糖一般在2 mmol/L以下，胰岛素浓度常≥100 mU/ L，胰岛素自身抗体（IAA）阳性。胰腺影像学无明显异常；停用甲巯咪唑，给与对症及激素治疗后，症状逐渐缓解，激素治疗与非激素治疗低血糖消失时间无明显区别。结论:甲巯咪唑致IAS是一种临床上少见的自身免疫性疾病，服药期间如出现低血糖或高血糖现象，应及时就诊和处理，正确治疗后，一般预后良好。     

丙肝病毒核心抗原检测诊断丙肝的临床价值评析

目的:探讨丙肝诊断中丙肝病毒核心抗原(HCV-c Ag)的诊断价值。方法:将疑似丙肝或丙肝患者38例作为研究组,同期筛查人群100例作为对照组,两组均抽取血清样本实施HCV-c Ag检测与丙肝病毒核心抗体(HCV-Ab)检测,并用反转录多聚酶链反应(RT-RNA)证实阳性者。结果:对照组HCV-Ab检测均为阴性,而HCV-c Ag检测显示阳性2例,经RT-RNA证实1例为阳性;研究组HCV-c Ag检出阳性20例,RT-RNA证实阳性24例,诊断符合率为83.33%。结论:HCV-c Ag检测诊断丙肝诊断符合率较高,对早期诊断有着积极的意义,值得借鉴。     

生物素标记的布鲁菌多克隆抗体的制备

目的制备生物素标记的兔抗牛种布鲁菌544A多克隆抗体,并进行鉴定。方法复苏并扩大培养牛种布鲁菌544A,灭活后制备灭活疫苗,经背部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,5次免疫后,经心脏采血,分离血清,采用硫酸铵盐析法对血清中的多克隆抗体进行粗提,再通过蛋白亲和柱层析法对抗体进一步纯化,利用SDS-PAGE分析抗体的纯度,间接ELISA法检测抗体的效价和特异性,Bradford法检测抗体的蛋白含量,并利用生物素对抗体进行标记。结果制备的牛种布鲁菌544A的兔多克隆抗体纯度较高,效价为1:256 000,特异性较好,蛋白含量为2.83 mg/ml,每摩尔蛋白中标记的生物素摩尔数为3.09。结论成功制备了生物素标记的牛种布鲁菌多克隆抗体,为下一步研制牛种布鲁菌免疫检测试剂盒奠定了物质基础。     

甲状腺自身抗体在甲状腺疾病诊断中的临床价值

目的:探究游离三碘甲状腺原氨酸(FT_3)、游离甲状腺素(FT_4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)联合检测在诊断甲状腺疾病的临床价值。方法:随机选取2018年1-11月在该院内分泌科治疗的甲状腺疾病患者383例作为研究对象。其中甲状腺功能亢进组193例、甲状腺功能减退组92例、桥本氏甲状腺炎组98例,选取同期健康体检者50例作为正常对照组;采用ROCHE E-170电化学发光分析系统对各组患者血清FT_3、FT_4、TSH、TPOAb、TGAb进行检测,对比分析其浓度和阳性率,并对其诊断符合率进行统计和比较。结果:甲状腺功能亢进组FT_3、FT_4水平均较正常对照组明显升高,TSH较正常对照组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);而甲状腺功能减退组FT_3、FT_4水平均较正常对照组明显降低,TSH较正常对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。甲状腺功能亢进组、甲状腺功能减退组和桥本氏甲状腺炎组TPOAb、TGAb浓度和阳性率均高于正常对照组(P<0.05)。甲状腺功能亢进组与甲状腺功能减退组阳性率最高的指标均为TSH,分别是98.45%、96.74%,桥本氏甲状腺炎组阳性率最高的指标是TPOAb,达98.98%。结论:FT_3、FT_4、TSH联合TPOAb、TGAb检测甲状腺功能是否存在异常或障碍具有较强的适用性,对其早期诊断及病症特征模糊时期诊断均具十分重要的作用,有利于疾病的诊断治疗及预后判断。     

抗肿瘤抗体药物的研究进展

经过30多年的发展,抗肿瘤抗体药物已成为癌症治疗中最成功和最重要的策略之一。本文综述了已上市的抗肿瘤抗体药物,详细介绍了临床应用较成功的药物靶点,包括CD20、表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)、表皮生长因子受体2(HER2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF),并总结了抗体偶联药物及癌症免疫疗法等新兴疗法的研究进展。     

综合医院肺炎病人血清中嗜肺军团菌抗体调查

目的调查我国三地区综合医院肺炎病人血清中嗜肺军团菌抗体水平。方法于2012年6月—2013年6月以北京、江苏和深圳3个地区的7家综合性医院的70名住院肺炎病人为研究对象,调查问卷收集基本信息,间接酶联免疫吸附法检测血清中嗜肺军团菌1—6血清型Ig G/Ig A/Ig M联合抗体。结果入院当天和入院两周后肺炎病人血清中嗜肺军团菌抗体阳性率分别为20%(7/35)和20%(7/35),其中5例肺炎病人双份血清均为阳性。结论我国综合医院肺炎病人存在嗜肺军团菌感染,采集入院当天和入院两周后血清同时进行嗜肺军团菌抗体检测可有效降低假阴性率。     

抗人细胞间粘附分子-1嵌合抗体的制备及其生物学活性

目的构建抗人细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)嵌合抗体的真核表达质粒,在CHO-dhfr-细胞中进行表达,并检测其生物学活性。方法采用RT-PCR法从特异性分泌抗人ICAM-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株3F2中扩增抗体VH和VL基因,从人淋巴细胞RNA中扩增人κ、IgG1的轻、重链恒定区序列,再通过重叠延伸PCR连接鼠源性可变区基因片段与人源性恒定区基因片段,获得人-鼠嵌合抗体基因;将轻、重链基因连接至pIRES双表达载体,构建嵌合抗体真核表达质粒;将质粒在脂质体LipofectAMINE介导下转染CHO-dhfr-细胞进行表达,表达的嵌合抗体经Protein A-Sepharose 4B亲和层析柱纯化后,紫外分光光度法测定抗体浓度,ELISA法检测嵌合抗体的特异性抗原结合活性及人源性,并进行还原性SDS-PAGE分析、Western blot分析及抑制细胞间黏附活性分析。结果嵌合抗体真核表达质粒pIRES-anti-ICAM-1经双酶切鉴定构建正确;嵌合抗体在真核细胞CHO-dhfr-中高效表达,培养上清中表达量可达0.5 mg/L;纯化的嵌合抗体经10%还原性SDS-PAGE分析,可见相对分子质量分别约为25 000的IgG轻链和50 000的IgG重链,相对分子质量约25 000的蛋白可被羊抗人IgGκ链所识别,而相对分子质量约50 000的蛋白可被羊抗人IgGγ链所识别;纯化的嵌合抗体可与羊抗人κ链或羊抗人IgG多抗呈强阳性反应,可与人ICAM-1抗原特异结合;该嵌和抗体具有良好的抑制内皮细胞与单核细胞黏附的活性。结论成功制备了抗人ICAM-1嵌合抗体,并在真核细胞中实现高表达,该抗体减少了鼠源性成分,降低了其免疫原性,为ICAM-1相关的炎性疾病的抗体治疗奠定了基础。